Качественные реакции на белки

Методы качественного обнаружения белков основаны на двух типах реакций: а) по пептидным связям белковой молекулы; б) по аминокислотным радикалам её. Примером реакции первого типа служит биуретовая реакция. Примерами реакций второго типа являются многочисленные цветные реакции на радикалы аминокислот. По характеру цветных реакций второго типа можно судить до некоторой степени о составе белков.

Оборудование: центрифуга (в препараторской) – 1 шт., водяная баня автоматическая, лабораторный термометр – 1 шт. (t = 0-100^оC), «кипятильники» (битый фарфор), бумажные фильтры «белая лента», химический стакан на 250 мл – 1 шт. (для собирания желтков, не используемых в опыте), химические стаканы на 100 и 150 мл – 2 шт., стеклянная палочка – 1 шт., стеклянная воронка – 1 шт. (для фильтрования), красная лакмусовая бумага – 1 туба (обнаружение аммиака), марля или бинт шириной 7-15 см (для фильтрования раствора белка куриного яйца), держатель для пробирок – 1 шт., ложечка для насыпания твёрдых веществ – 1 шт., шпатель металлический – 1 шт., скальпель – 1-2 шт. (разбить скорлупу яйца), ножницы.

Реактивы: свежее куриное яйцо (или свежее говяжье мясо, молоко или пшеничная мука) – 1 шт., насыщенный раствор сульфата аммония на 250 мл, кристаллический сульфат аммония, 10% раствор гидроксида натрия, 30% раствор гидроксида натрия, 1% раствор сульфата меди (II), ледяная уксусная кислота, концентрированная серная кислота, концентрированная соляная кислота, концентрированная азотная кислота, 1% раствор уксусной кислоты, 10% раствор уксусной кислоты, глиоксиловая кислота, 1% раствор сульфаниловой кислоты, 5% раствор нитропруссида натрия, 25% раствор аммиака, раствор тетрагидроксоплюмбита натрия, насыщенный раствор пикриновой кислоты, 10% раствор хлорида натрия, насыщенный раствор хлорида натрия, 5% раствор трихлоруксусной кислоты, 20% раствор сульфосалициловой кисло­ты, 5% раствор сульфата меди (II), 5% раствор ацетата свинца, насыщенный раствор фенола, 96% раствор этилового спирта,

10% раствор вольфрамата натрия, 0,66 н. раствор серной кислоты.

Приготовление растворов белков для проведения качественных реакций.Неразбавленный белок куриного яйца. Белок одного куриного яйца отделяют от желтков. Считая, что масса белка в одном яйце в среднем равна 33 г, получают около 30 мл неразбавленного раствора белков куриного яйца.

Полученный раствор содержит 88% воды, 1% углеводов и 0,5% минеральных веществ; остальное приходится на белок. Таким образом, полученный не­разбавленный белок куриного яйца представляет собой пример­но 10%-ный раствор белка.

Разбавленный раствор яичного альбумина. Белок одного куриного яйца после отделения от желтка хорошо взбивают и затем смешивают в колбе при встряхивании с 10-кратным объёмом дистиллированной воды. Раствор филь­труют через двойной слой смоченной водой марли, помещенный в стеклянную воронку. Отфильтровывают раст­вор яичного альбумина; в осадке остается яичный глобулин.

Учитывая, что концентрация альбумина в белке куриного яйца составляет около 6%, полученный разбавленный раствор яичного альбумина является примерно 0,5%-ным.

Белки мяса. Помещают в стакан 40-50 г пропущенного через мясорубку обезжиренного мяса, добавляют 80-100 мл 10%-ного раствора хлорида натрия и оставляют смесь стоять 15-20 мин при частом помешивании. Отфильтровывают через бумажный складчатый фильтр или через двойной слой марли окрашенную в красный цвет жидкость. В растворе содержится главным образом мышечный альбумин и глобулин.

Белки молока. К 50 мл свежего молока добавляют рав­ный объем насыщенного раствора сульфата аммония. При этом выпадают в осадок глобулины и казеин. Отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр раствор альбуминов.

Растительный альбумин. 25 г пшеничной муки смешивают со 100 мл дистиллированной воды, и смесь встряхивают в течение 1 ч. Взвесь муки центрифугируют и надосадочную жидкость фильтруют через складчатый фильтр. Отфильтрованный прозрачный раствор содержит преимущественно альбумин пшеничных зерен.