Распределение ферментов в клетке
Распределение ферментов по субклеточным органеллам изучают после предварительного фракционирования клеточных гомогенатов путём высоко- скоростного центрифугирования, определяя содержание ферментов в каждой фракции (рис. 4.1.1).
Рис. 4.1.1. Схема разрушения клеток
Ни одна из фракций не представляет собой чистые органеллы. Маркерный фермент или химический компонент ‒ это тот компонент, который присутствует практически только в составе данного типа органелл. Другими словами, маркер служит индикатором присутствия или отсутствия фракций тех органелл, в составе которых он находиться (табл. 4.1.1).
Локализацию данного фермента в ткани или клетки часто удаётся установить in situ гисто-химическими методами. Для этого тонкие (от 2 до 10 мкм) срезы замороженной ткани обрабатывают раствором субстрата, к которому специфичен данный фермент. В тех местах, где находится фермент, образуется продукт, катализируемый этим ферментом реакции.
Если продукт окрашен и нерастворим, он остаётся на месте образования и позволяет локализовать фермент. Гистоэнзимология даёт наглядную и, в известной мере физиологическую картину распределения ферментов в компартментах клетки.
Большинство ферментов имеют внутриклеточную локализацию и неравномерное распределение в организме. Ферменты определённого метаболического пути, как правило, находятся в одном компартменте клетки. Особенно важно разделение метаболических путей на анаболические и катаболические процессы, которые являются противоположно направленными.
Таблица 4.1.1
Маркерные ферменты,
определяемые при субклеточном фракционировании
Фермент | Субклеточные фракции |
ДНК-полимераза | ядро |
Сукцинатдегидрогеназа | митохондрии |
Цитохромоксидаза | митохондрии |
Глюкоза-6-фосфатаза | ЭПР |
Кислая фосфатаза | лизосомы |
Рибонуклеаза | лизосомы |
Каталаза | пероксисомы |
Уратоксидаза | пероксисомы |
5′-Нуклеотидаза | плазматическая мембрана |
Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа | цитозоль |
Лактатдегидрогеназа | цитозоль |
Фосфофруктокиназа | цитозоль |
Дата добавления: 2020-10-01; просмотров: 500;