Определение альбуминов в сыворотке крови

Содержание гемоглобина в крови рыб. Гемоглобин это дыхательный белок красного цвета,содержащийся в эритроцитах. Его количество имеет важное диагностическое значение. В крови рыб оно, приблизительно, следующее (г%): у осетровых (стерлядь, севрюга, осетр) - от 8,3 до 10,8; у большинства пресноводных - от9,2 до 11,0; у окуня, судака, щуки и леща колеблется от 4,0 до 8,5.

Понижение содержаниягемоглобина указывает на угнетение кроветворения, что чаще всегоявляется неблагоприятным признаком, номожет служить такжеи показателем исключительно хороших кислородных условий.

Определение гемоглобинапо Сали.

Оборудование и реактивы: гемометр Сали (ГС-3), капилляр с отметкой 0,02 мл, 0,1N-раствор соляной кислоты(8,2 мл НСl удельного веса 1,19 на 1 литр дистиллированной воды), дистиллированная вода.

Ход определения. Среднюю пробирку гемометра наполняют до нижней метки 0,1 раствором соляной кислоты. Набирают кровь в капилляр до метки (0,02 мл),не допуская попадания пузырьковвоздуха и удаляют ее излишек путем прикладывания фильтровальной бумаги к кончику капилляра. Осторожно выдувают кровь на дно пробирки так,чтобыверхний слой соляной кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетки, ополаскивают ее соляной кислотойиз верхнего слоя. Посте этого содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по ее дну. Точно через 5 мин добавляют по каплям дистиллированную воду, жидкость перемешивают стеклянной палочкой, пока цветность не совпадет с цветом стандарта. Определяют количество гемоглобина в, г% по ниж­нему мениску. Если в гемометре имеется шкала, градуированная в ед. гемоглобина (за 100 ед. принимают 0,001 г-экв. гемоглобина, то есть 16.67г%), то полученный показатель следуетразделить на 6.

Точность гемометра проверяют по образцам крови, содержание гемоглобина в которых определено на спектрофотометре или ФЭКе, или по новому прибору, не бывшему в употреблении.

Источники ошибок:

1.Искажение цвета соляно-кислого гематина, обусловленное количеством и характером плазменных белков.

2.Неточное соблюдение 5 мин выдержки перед началом разведения, т.к. гематиновая окраска со временем усиливается.

3.Выцветание стандартов.

4.Неточная концентрация НС1.

Примечание: равенство диаметров трех пробирок гемометра – непременное условие правильного определения гемоглобина. Проверка: при установке на горизонтальной поверхности все круговые метки должны находиться на одном уровне. В связи с этим нельзя заменять разбившуюся среднюю пробирку любой другой. Гемометр требует тщательного ухода. После работы капиллярную пипетку следует хорошо промыть водой, спиртом с эфиром, а затем высушить, продувая через нее воздух резиновым баллоном. После слива исследованной жидкости пробирку промывают водой и ополаскивают 0,1N раствором соляной кислоты. Гемометр хранить в закрытой коробке, чтобы предохранить стандарты выцветания.

Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Скорость оседания эритроцитов зависит от химического состава и физических свойств крови. В норме у здоровых карповых и осетровых рыб СОЭ колеблется от 3 до 10 мм/ч. При воспалительных процессах и инвазиях СОЭ увеличивается.

Для определения СОЭ используют аппарат Панченкова, представляющий собой штатив, в который вертикально вставлены градуированные капилляры (миллиметровая шкала длиной 10 см) заполненные разбавленной кровью. Капилляры перед использованием промывают для предотвращения свертывания крови 5%-ным раствором трехзамещенного цитрата натрия. Раствор набирают в капилляр до отметки против деления 50 «Р» (реактив) и спускают на часовое стекло. Затем этим жекапилляром дважды набирают кровь до верхней нулевой отметки – «К»(кровь) и спускают на то же стекло. Смесь хорошо перемешивают и вновь набирают в капилляр до отметки «К», не допуская попадания пузырьков воздуха. Капилляр ставят в штатив аппарата Панченкова на 1 ч, после чего отмечают высоту столбика жидкости в верхней части капилляра, освободившейся от эритроцитов, выражая результаты вмм/ч.

Определение осмотической резистентности эритроцитов (ОРЭ). Клетки крови приспособлены к обитанию в изотонической средекровяной плазмы, которая изотонична 0,65%-ному раствору хлористого натрия. Если помешать эритроциты в более разбавленные растворы, то это является испытанием их осмотической устойчивости. При некоторой раз­бавленности раствора эритроциты лопаются. Осмотическая резистентность эритроцитов может служить показателем различных воздействий на организм. В норме эритроциты карпа выдерживают разбавление среды до 0,33-0,39% хлористого натрия. Действие токсикантов, а также болезней уменьшает резистентность эритроцитов. Наиболее простым является пробирочный способ определения ОРЭ. Для этого в ряде про­бирок готовят растворы хлористого натрия в уменьшающейся концентрации (от 0,80 до 0,20%) с таким расчетом, чтобы в каждой последующей пробирке концентрация раствора была на 0,02% ниже предыдущей.

Предварительно хлористый натрий химически чистый высушивают в эксикаторе до постоянной массы. Готовят 10%-ный раствор путем растворения в дистиллированной воде: 180 г NаС1,27-31 г Nа₂HPO₄ и 4,86 г NаH₂РО_4*2H₂О. Объем доводят дистиллированной водой до 2 л (вода не должна бить кислой). Такой раствор можно хранить несколько месяцев. Из него перед употреблением готовят 1%-ный раствор, которого в первую пробирку наливают 0,80мл, во вторую - 0,78 и так с интервалом 0,02 до 0,20 мл, а затем другой пипеткой доливают во все пробирки дистиллированную воду до 1 мл (отмеривать точно). В каждую пробирку, начиная с высоких концентраций, добавляют каплю крови. Чтобы капли были равные, необходимо взят пипетку от гемометра Сали, в которую кровь набирают до метки. После смешивания пробирки оставляют при комнатной температуре на 30 мин и затем снова встряхивают.

Там, где эритроциты растворились, жидкостьстановится ярко-красной и совершенно прозрачной. Помере нарастания концентрации соли, окраска слабее, т.к. там содержится часть негемолизированных эритроцитов. Первая прозрачная пробирка на границе с мутными пока­зывает максимальную резис-тентность. Пробирки с мутным содержимым центрифугируют в течение 15 мин при 2000 об./мин. Там, где эритроциты не растворились, жидкость совершенно не окрашена, а где час­тично - желтоватый цвет. Первая пробирка с самым слабым окрашиванием показывает минимальную резистентность. Здесь растворяются самые неустойчивые эритроциты. Результаты ОРЭ выражаются в процентах (например, 0,42%).

Оценка полученных результатов

Сопоставление всех полученных сведений об анализируемой рыбе позволяет оценить ее общее состояние и при наличии нарушений выявить причины, которые могли вызвать те или иные нарушения. Для принятия рыбоводных, хозяйственных и организационных решений следует сопоставить физиолого-биохимическую информацию с рыбоводными данными, а также с данными ихтиопатологических исследований и гидрохимии. Необходимо учитывать эпизоотическую ситуацию, а также воздействие неспецифических факторов среды (загрязнение и др.) для правильного толкования полученных результатов.

8. ХАРАКТЕРИСТИКА КОРМОВОГО СЫРЬЯ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА СУХИХ КОМБИНИРОВАННЫХ КОРМОВ

При производстве комбикормов, премиксов используют большое разнообразие различных по происхождению компонентов, добавок, биологически-активных веществ и препаратов. Кормовое сырье подразделяют на компоненты животного, растительного, микробиологического происхождения. Считается, что чем больше компонентов входит в состав комбикорма, тем выше его питательность и эффективность [22,23, 63], однако есть и малокомпонентные высокопитательные комбикорма на основе сырья высокого качества.