Оценка гемолиза по цветному стандарту
Показатели | Пробирки | ||||||||
Количество гемо лизированной жидкости, мл | 0,1 | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 | 0,6 | 0,7 | 0,8 | 0,9 |
Количество воды, мл | 0,9 | 0,8 | 0,7 | 0,6 | 0,5 | 0,4 | 0,3 | 0,2 | 0,1 |
Содержание Нв в цветном стандарте, г% | 0,18 | 0,36 | 0,54 | 0,72 | 0,90 | 1,08 | 1,26 | 1,44 | 1,62 |
Цвет | светло-розовый | розовый | Розово-красный | красный | |||||
Степень гемолиза | Слабый | явственный | Сильный | Очень сильный |
Содержание общего белка в крови рыб (рефрактометрический метод). Содержание белка в сыворотке крови менее 2% - показатель неудовлетворительного состояния организма. Уменьшение его отмечается в ответ на воздействие низких температур и некоторых токсинов. Однако низкие значения содержания белка в крови могут быть и при нормальном ходе физиологических процессов, например, у особей в посленерестовый период (табл.53).
Оборудование и реактивы: рефрактометр, бумага фильтровальная, вата, палочка стеклянная, смесь спирта и эфира для обезжиривания (1:1).
Ход определения. Раскрывают камеру с призмами, ополаскивают их водой, промокают фильтровальной бумагой, ватой и протирают спиртоэфирной смесью. Показатель преломления дистиллированной воды на рефрактометре при 20о равен 1,333. Это значит, что прибор установлен и работает правильно. Сыворотку крови получают, такописано выше.
Наносят на призму каплю исследуемой сыворотки, закрывают камеру и делают отсчет. Настройку прибора сбивают и определение повторяют дважды. Используют среднюю величину отсчета, до которой определяют содержание белка, пользуясь табл.12. Если температура отличается от 200С, то вводят поправку – 0,0001 на каждый градус (поправку вычитают при более низкой температуре и прибавляют при более высокой). Результаты могут быть искажены за счет веществ сыворотки с высоким показателем преломления. Например, липидов или за счет гемолиза.
При наличии гемолиза необходимо из результата определенияобщего содержания белка вычесть экспериментально установленную поправку на степень гемолиза: при «+» - 0,6-0,7; при «++» - 1,2-1,4; сильно гемолизированная сыворотка для определения общего содержания белка использована быть не может.
Таблица 53
Содержание общего белка в сыворотке крови прудовых рыб, %*
Возраст, Масса, г | Условия, особенности | Белок, % |
Карп | ||
0+ | Нормальное состояние, лето | ³3,0 |
Плохие условия, лето | £2,5 | |
Нормальное состояние, осень | 3,0-4,5 | |
В конце зимовки | 1,5-1,7 | |
1+ | Плохие условия, весна | £2,5 |
Хорошие условия, весна | ³2,8 | |
Хорошие условия, лето | ³3,5 | |
Плохие условия, бетонные садки, лето | £2,8 | |
Голод (бетонные садки): октябрь-май | 3,1 | |
Октябрь-июнь | 2,1 | |
Октябрь-август | 1,4 | |
Больной краснухой, июль | 0,6 | |
До нереста | 5,7 | |
После нереста | 4,1 | |
Пестрый толстолобик | ||
1+ | Нормальное состояние, лето | 3,6±0,1 |
4+ | После введения гормона | 1,7-3,0 |
Производитель с плохой икрой | 0,7-1,0 | |
Белый толстолобик | ||
1+ | Нормальное состояние, лето | 4,6±0,2 |
45 дней корм сине-зеленые водоросли | 1,9±0,2 | |
Форель радужная | ||
10-15 | Нормальное состояние, зима | 2,6 |
80-150 | Нормальное состояние, зима | 3,8 |
25-30 | Нормальное состояние, июль | 5,4 |
60-80 | Нормальное состояние, осень | 6,2 |
Нормальное состояние, осень | 7,8 | |
60 дней голодания | 1,7 | |
60 дней голодания | 2,1 | |
Производитель | Перед созреванием | 10,0 |
*по системе единиц (СИ) выражается в г/л. Например, 3,0 г% по старой системе соответствует 30 г/л по новой.
Определение белковых фракций (альбуминов и глобулинов) рефрактометрическим методом. Уменьшение альбуминов в сыворотке кровинаблюдается при дистрофии. Повышение глобулина - при инфекционных заболеваниях. У сеголетков и двухлетков карпов с хорошей кондицией альбуминов не менее 22%.
Оборудование и реактивы: рефрактометр, центрифуга, водяная баня, аммоний сернокислый - (NН4)2SO4, центрифужные пробирки.
Ход определения: готовят насыщенный раствор сернокислого аммония путем растворения 80 г его кристаллов в 100 мл горячей дистиллированной воды, фильтруют и для перенасыщения колбу ставят на 15-20 мин в воду с температурой 18-20оС. Чтобы убедиться в том, что насыщенный раствор приготовлен правильно, из него готовят полунасыщенный раствор путем смешивания с дистиллированной водой в равных соотношениях (1:1). Показатель преломления правильно приготовленного раствора должен быть равен 1,370. Если такого значения не получается, то насыщенный раствор следует приготовить заново.
Смешивают полученную сыворотку крови с насыщенным раствором (NН4)2SO4 1:1 (точно), смесь центрифугируют 8-10 мин. Цетрифужные пробирки должны быть закрыты резиновыми пробками во избежание испарения золы, которое может привести к завышенным данным (удобно пользоваться предлагаемыми нами стандартными полихлорвиниловыми трубочками). После центрифугирования глобулины находятся в осадке, над ними в прозрачной жидкости - альбумины и (NH4)2SO4 . Помещают 1-2 капли центрифугата в камеру прибора и учитывают показатель преломлений - n. . Затем измеряют показатель преломления цельной сыворотки крови – n2 (табл.54).
Расчет содержания альбуминов и глобулинов. Содержание альбуминов (%) в исследуемой пробе находят по табл. 55, в которой представлен также показатель преломления дистиллированной воды, альбуминов и небелковых веществ – n3. Содержание глобулинов устанавливают расчетом. Для этого из показателя преломления цельной сыворотки крови – n2 вычитают показатель n3, а полученную разность делят на 0,00229 (показатель 1%-аого раствора глобулинов) и получают процентное содержание глобулинов.
Отношение содержания альбуминов к содержанию глобулинов показывает белковый коэффициент: К= А/Г
Отмечается, что увеличение количества глобулинов и уменьшение количества альбуминов в сыворотке крови сопутствует ускорению СОЭ.
Таблица 54
Дата добавления: 2020-08-31; просмотров: 491;