Оценка гемолиза по цветному стандарту

Содержание общего белка в крови рыб (рефрактометрический метод). Содержание белка в сыворотке крови менее 2% - показатель неудовлетворительного состояния организма. Уменьшение его отмечается в ответ на воздействие низких температур и некоторых токсинов. Однако низкие значения содержания белка в крови могут быть и при нормальном ходе физиологических процессов, например, у особей в посленерестовый период (табл.53).

Оборудование и реактивы: рефрактометр, бумага фильтровальная, вата, палочка стеклянная, смесь спирта и эфира для обезжиривания (1:1).

Ход определения. Раскрывают камеру с призмами, ополаскивают их водой, промокают фильтровальной бумагой, ватой и протирают спиртоэфирной смесью. Показатель преломления дистиллированной воды на рефрактометре при 20^о равен 1,333. Это значит, что прибор установлен и работает правильно. Сыворотку крови получают, такописано выше.

Наносят на призму каплю исследуемой сыворотки, закрывают камеру и делают отсчет. Настройку прибора сбивают и определение повторяют дважды. Используют среднюю величину отсчета, до которой определяют содержание белка, пользуясь табл.12. Если температура от­личается от 20⁰С, то вводят поправку – 0,0001 на каждый градус (поправку вычитают при более низкой температуре и прибавляют при более высокой). Результаты могут быть искажены за счет веществ сыворотки с высоким показателем преломления. Например, липидов или за счет гемолиза.

При наличии гемолиза необходимо из результата определенияобщего содержания белка вычесть экспериментально установленную поправку на степень гемолиза: при «+» - 0,6-0,7; при «++» - 1,2-1,4; сильно гемолизированная сыворотка для определения общего содержания белка использована быть не может.

Таблица 53

Содержание общего белка в сыворотке крови прудовых рыб, %*

*по системе единиц (СИ) выражается в г/л. Например, 3,0 г% по старой системе соответствует 30 г/л по новой.

Определение белковых фракций (альбуминов и глобулинов) рефрактометрическим методом. Уменьшение альбуминов в сыворотке кровинаблюдается при дистрофии. Повышение глобулина - при инфекционных заболеваниях. У сеголетков и двухлетков карпов с хорошей кондицией альбуминов не менее 22%.

Оборудование и реактивы: рефрактометр, центрифуга, водяная баня, аммоний сернокислый - (NН₄)₂SO₄, центрифужные пробирки.

Ход определения: готовят насыщенный раствор сернокислого аммония путем растворения 80 г его кристаллов в 100 мл горячей дистиллированной воды, фильтруют и для перенасыщения колбу ставят на 15-20 мин в воду с температурой 18-20^оС. Чтобы убедиться в том, что насыщенный раствор приготовлен правильно, из него готовят полунасыщенный раствор путем смешивания с дистиллированной водой в равных соотношениях (1:1). Показатель преломления правильно приготовленного раствора должен быть равен 1,370. Если такого значения не получается, то насыщенный раствор следует приготовить заново.

Смешивают полученную сыворотку крови с насыщенным раствором (NН₄)₂SO₄ 1:1 (точно), смесь центрифугируют 8-10 мин. Цетрифужные пробирки должны быть закрыты резиновыми пробками во избежание испарения золы, которое может привести к завышенным данным (удобно пользоваться предлагаемыми нами стандартными полихлорвиниловыми трубочками). После центрифугирования глобулины находятся в осадке, над ними в прозрачной жидкости - альбумины и (NH₄)₂SO₄ . Помещают 1-2 капли центрифугата в камеру прибора и учитывают показатель преломлений - n. . Затем измеряют показатель преломления цельной сыворотки крови – n₂ (табл.54).

Расчет содержания альбуминов и глобулинов. Содержание альбуминов (%) в исследуемой пробе находят по табл. 55, в которой представ­лен также показатель преломления дистиллированной воды, альбуминов и небелковых веществ – n_3. Содержание глобулинов устанавливают расчетом. Для этого из показателя преломления цельной сыворотки крови – n₂ вычитают показатель n₃, а полученную разность делят на 0,00229 (показатель 1%-аого раствора глобулинов) и получают про­центное содержание глобулинов.

Отношение содержания альбуминов к содержанию глобулинов показывает белковый коэффициент: К= А/Г

Отмечается, что увеличение количества глобулинов и уменьшение количества альбуминов в сыворотке крови сопутствует ускорению СОЭ.

Таблица 54