Определение креатинина при помощи градуировочной кривой

1. Приготовление стандартного раствора креатинина (177 мкмоль/л): на аналитических весах взвесить 0,0013 г креатинина и растворить его в мерной колбе на 100 мл, довести содержимое колбы до метки.

2. Рассчитать концентрацию креатинина в полученном растворе (в мг/л).

3. Подготовить растворы для построения градировочной кривой (в соответствии с таблицей 7), объёмы довести до 10 мл и рассчитайте содержание креатинина (в мг/л) в полученных растворах.

4. Подготовить исследуемый образец: перед определением содержания креатинина мочу разводят в 100 раз. Это разведение учитывают при расчётах.

5. В экспериментальной пробе смешивают 2 мл мочи, 1 мл дистиллированной воды, 1 мл трихлоруксусной кислоты (ТХУ), 2 мл пикриновой кислоты, 2 мл NaOH.

6. Через 20 мин. исследуемый раствор и растворы-образцы колориметрируют на зелёном светофильтре (длина волны 540 нм) в кювете толщиной 1 см.

Таблица 7. Приготовление растворов для построения калибровочной кривой

Образуется вещество из креатинфосфата, находящегося в мышцах. Это довольно сильный энергетический источник, с помощью него сокращаются мышцы. Остальная доля креатинина приходится на мозг. Креатинин в моче различен у мужского пола и женского. Вещество содержится не только в моче, но и крови. Его количество прямо пропорционально состоянию системы мышц, плюс к тому, почечной функции выделения. Рассматриваемая молекулярная структура, как выяснено было ранее, напрямую зависит от объема ткани мышц. Норма креатинина в моче у мужчин, практически, в два раза больше, чем у женщин. Это связано с физиологическим строением.

Креатинин, как и другие компоненты остаточного азота, выделяется почками с мочой. Определение уровня креатинина в моче позволяет судить о состоянии почек. В норме содержание креатинина в моче у женщин составляет 5,3 – 15,9 ммоль/л, у мужчин 7,1 – 17,7 ммоль/л. При нарушении выделительной функции почек уровень креатинина в моче снижен. Другими возможными причинами сниженного креатинина в моче являются: повышенная выработка гормонов щитовидной железы (гипертиреоз), анемия, заболевания мышц и др.

Клинико-диагностическое значение. Определение содержания креатинина проводят для исследования функции почек. Его содержание в сыворотке крови увеличивается при значительном ухудшении функции почек. Креатинемия наблюдается также при закупорке мочевых путей, кишечной непроходимости, тяжелом диабете, механической желтухе, гипофункции надпочечников, голодании. Увеличение креатинина в моче наблюдается при усиленной мышечной работе, лихорадочных состояниях, пневмонии, выраженной недостаточной функцией печени. Понижение креатинина в моче – при мышечной дистрофии, голодании, дегенерации почек, лейкемии.

Источник лабораторной работы: Титова Н.М. Биохимия и молекулярная биология. Версия 1.0 [Электронный ресурс]: лаб. практикум / Н. М. Титова, Т. Н. Замай, Г. И. Боровкова. – Электрон. дан. (1 Мб). – Красноярск : ИПК СФУ, 2008. – (Биохимия и молекулярная биология)