II. Измерение оптической плотности раствора.

Осуществляют подготовку спектрофотометра ПЭ-5400УФ для проведения измерений: для измерений применяют кварцевые кюветы с толщиной слоя ℓ = 1,0 см; фотометрирование раствора проводят при λ = 267 нм относительно раствора сравнения, содержащего все компоненты, кроме рибофлавина.

Внешний вид спектрофотометра ПЭ-5400УФ

1. Спектрофотометр ПЭ-5400УФ включают нажатием кнопки «Сеть» на задней панели прибора. Кюветное отделение должно быть пустым. В течение некоторого времени прибор будет прогреваться (20 мин.) и проводить автоматическую самодиагностику (50 с). В это время в приборе восстанавливаются настройки, действовавшие в момент выключения, и автоматически выполняется процедура калибровки нуля.

2. Когда на дисплее появится надпись «Переход в режим измерения», можно приступать к анализу. Для измерения оптической плотности растворов последовательным нажатием кнопки «Режим» выбирают «А» (на дисплее соответствующее буквенное обозначение выделяется подсветкой).

3. Измерение оптической плотности:

- в ячейки кюветодержателя последовательно устанавливают кюветы с раствором сравнения и 1-3 – с исследуемыми растворами;

- при помощи ручки перемещения кювет в рабочую зону подводят кювету с раствором сравнения;

- для установки длины волны нажимают кнопку «Переход λ»;

- перемещением маркера знакоместа λ < l («Меню») и λ  > («Нуль») и прокруткой кнопок «▲» и «▼» устанавливают необходимое значение длины волны λ (нм); нажимают кнопку «Ввод/старт», после чего прибор автоматически переходит в режим измерения;

- калибровка нуля выполняется автоматически;

- затем при помощи ручки перемещения кювет в рабочую зону перемещают кювету с анализируемым раствором, на дисплее высветится его оптическая плотность при выбранной длине волны (изменять длину волны рекомендуется при закрытой крышке кюветного отделения, и когда в рабочей зоне находится раствор сравнения, иначе придется производить установку нуля нажатием кнопки «Нуль»);

- после проведения измерений вынимают кюветы из кюветного отделения, тщательно промывают и протирают;

- выключают прибор.