По механизму действия и строению активного центра

Гидролазы – это третий класс ферментов. Сюда относятся многие ферменты, имеющие промышленное значение, и большинство пищеварительных ферментов. Общим свойством всех гидролаз является то, что они катализируют реакции гидролиза, то есть расщепление более сложных соединений на более простые с присоединением воды. К классу гидролаз относятся также протеолитические ферменты (подкласс 3.4), катализирующие гидролиз пептидов и белков и имеющие большое значение в теоретической энзимологии и в практике применения ферментных препаратов. Согласно современной номенклатуре и классификации ферментов, протеолитические ферменты принадлежат к подклассу пептидаз – гидролаз и по механизму действия делятся на 4 типа:

1. Аминопептидазы (3.4.1; α-аминоацилпептид – гидролазы). Отличительной чертой этих ферментов является то, что для их действия необходимо наличие в молекуле субстрата свободной α-аминной группы (например, лейцинаминопептидаза, аминотрипептидаза и др.);

2. Карбоксипептидазы (3.4.2; пептидил-аминокислотные гидролазы). Как показывает само название, для действия фермента необходимо наличие в молекуле субстрата свободной карбоксильной группы (например, карбоксипептидаз А, карбоксипептидаза В и др.);

3. Дипептидазы (3.4.3; дипептид – гидролазы). Согласно современным данным, существование дипептидаз, действующих на многие дипептиды, кажется весьма сомнительным. В то же время в различных объектах обнаружены дипептидазы с весьма высокой специфичностью. Таковы, например, глицилглицин-дипептидаза, иминодипептидаза, имидодипептидаза.

4. Протеиназы (3.4.4; пептидил-пептид – гидролазы). Сюда относятся ферменты, составляющие по классификации М. Бергманна группу эндопептидаз. Эндонептидазы, в отличие от экзопептидаз, способны гидролизовать не только концевые пептидные связи, но и связи, расположенные внутри белковых молекул. В эту группу входит ряд хорошо изученных ферментов, имеющих большое практическое значение (например, пепсин, трипсин идр.).

Многие протеолитические ферменты образуются в виде «зимогенов» – неактивных предшественников. Таковы пепсин, реннин, химотрипсин, трипсин, тромбин, карбоксипептидаза. За последние годы достигнуты большие успехи в изучении процесса активации – превращения предшественников (зимогенов) в активные ферменты. Установлено, что в основе процесса активации лежит так называемый ограниченный протеолиз (см. лекцию 4.1).

Синтез протеиназ в неактивной форме и ряда других неактивных белков-предшественников имеет, очевидно, определенный биологический смысл, предотвращая разрушение клеток органов, в которых образуются проферменты. Примерами подобного активирования белков является активирование некоторых гормонов (проинсулин → инсулин), белка соединительной ткани (растворимый проколлаген → в нерастворимый коллаген), белков свертывающей системы крови.

Большой интерес представляет строение активного центра протеолитических ферментов. В зависимости от строения активного центра протеолитические ферменты можноразделить на три группы. Первая группа включает ферменты, не требующие присутствия активаторов; сюда относятся трипсин, химотрипсин, пепсин. Вторая группа включает энзимы, которыетребуют активации такими веществами, как цистеин, глютатион, аскорбиновая кислота, цианид; сюда относятся некоторые катепсины, папаин, фицин. Третью группу составляют энзимы – металлопротеины. Активность этихферментов сильно увеличивается в присутствии ионов металллов, таких, как Mn²⁺, Mg²⁺, Zn²⁺, Со²⁺ и др. Первая группа протеаз может быть разделена на две подгруппы. К первой подгруппе относятся ферменты, действующие в кислой зоне рН (пепсин, реннин) о строении их активных центров известно сравнительно немного. Есть данные, что для каталитического действия пепсина большое значение имеют остатки тирозина и аспарагиновой кислоты. Ко второй подгруппе относятся ферменты, имеющие оптимум рН в щелочной зоне и составляющие группу так называемых «сериновых» протеаз (трипсин, химотрипсин, тромбин, панкреатопептидаза Е, субтилопептидаза).