ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ОНИХОМИКОЗОВ

Эта глава написана не для сотрудников лабораторий, а для лечащих онихомикозы врачей, которые направляют материал в лаборатории. Здесь даны указания, как собирать материал для исследования, и описано, что представляют собой эти исследования. Врач должен знать, чего он требует от лаборатории и какие сведения и когда она может ему предоставить.

Микробиологическое исследование материала, взятого из пораженных ногтей, должно установить, во-первых, инфекционную природу заболевания и показать, что возбудитель - гриб и, во-вторых, вид или хотя бы род этого гриба. Первая задача решается почти всегда успешно, для этого требуется только микроскопическое исследование материала. Вторая задача решается редко и с успехом не более чем в половине случаев. Для установления вида возбудителя требуется посев материала на питательную среду с последующей идентификацией выделенной культуры. Эти методы сложнее, чем обычная микроскопия, и занимают немало времени. Вместе с тем только установление вида возбудителя, полученного в культуре, позволит определить этиологию онихомикоза. Знание этиологии определяет выбор системного противогрибкового средства, поэтому системное лечение лучше не начинать, не дождавшись ответа лаборатории. Однако ответ дают далеко не всегда. Виновным в этом часто оказывается врач.

Сбор материала

Правильный сбор материала из пораженных ногтей - залог успешного микробиологического исследования. Забирая материал, не всегда захватывают участки ногтя, содержащие жизнеспособные грибы. Нежизнеспособные грибы в культуре, естественно, не вырастут, и их вид установить не удастся.

Участок ногтя, который надо взять, определяется формой онихомикоза. Так, при поверхностной форме онихомикоза следует делать соскобы с поверхности ногтевой пластинки. При самой распространенной дистальной подногтевой форме наиболее жизнеспособные грибы располагаются под ногтевой пластинкой. Материал, который направляют на исследование, должен включать не только обрезок ногтевой пластинки, но и соскоб с ногтевого ложа, из-под пластинки. Кроме того, следует захватывать и области неизмененного ногтя, поскольку на границе между ними и пораженными участками ногтя располагаются самые активные грибы. При проксимальной подногтевой форме брать материал трудно. В этих случаях иногда, особенно если собираются проводить гистологическое исследование или дифференциальную диагностику, предпринимают биопсию ногтя, изредка используют бормашину. При паронихиях делают соскобы с проксимального валика и из-под него. Во всех случаях, чтобы избежать бактериальной контаминации, перед взятием образца следует обработать ноготь этиловым спиртом.

Микроскопия

Материал обрабатывают 10-30% раствором едкого кали, чтобы растворить кератин, и изучают под световым микроскопом. Чтобы лучше были видны части мицелия плесневых грибов, иногда к раствору едкого кали добавляют чернила. При микроскопии обнаруживают нитевидные гифы грибов или почкующиеся клетки (рис. 3.2.1). Таким образом, микроскопия дает заключение только о грибковой природе инфекции, но не о виде гриба-возбудителя. Конечно, результативность микроскопического исследования зависит от квалификации сотрудника лаборатории.

Рис. 3.2.1. Микроскопия соскоба с ногтей, пораженных Т. rubrum. Видны гифы гриба.

Культура

Проводят посев материала на стандартную среду Сабуро, часто с добавками антибиотиков. В диагностике дерматофитных инфекций принято добавлять в среду Сабуро циклогексимид, подавляющий рост грибов-контаминантов, попадающих из воздуха. Существуют готовые коммерческие среды с добавками антибиотиков и циклогексимида. Следует помнить, что многие плесневые грибы-недерматофиты и некоторые виды Candida не растут на среде с циклогексимидом, поэтому рекомендуется делать посев на среду Сабуро с циклогексимидом и на среду без него. Идентификацию видов обычно проводят при микроскопическом исследовании выросшей культуры или путем пересева на селективные среды (рис. 3.2.2-3.2.15).

Рис. 3.2.2. Культура гриба Т. rubrum, выделенного из пораженных ногтей. Получена на среде Сабуро (слева) и кукурузном агаре (справа).

Рис. 3.2.3. Культура гриба Т. mentagrophytes var. interdigitale, выделенного из пораженных ногтей. Получена на среде Сабуро.

Рис. 3.2.4. Культура гриба Candida albicans. Получена на среде Сабуро.

Рис. 3.2.5. Культура гриба Torulopsis glabrata, выделенного из пораженных ногтей. Получена на среде Сабуро.

Рис. 3.2.7. Микроморфология Acremonium sp., выделенного из пораженных ногтей.

Рис. 3.2.6. Культура гриба Ulocladium sp., выделенного из пораженных ногтей.

Рис. 3.2.8. Микроморфология Fusarium sp., вьщеленного из пораженных ногтей.

Рис. 3.2.9. Микроморфология Scopulariopsis sp., выделенного из пораженных ногтей.

Рис. 3.2.10. Микроморфология Candida albicans, выделенного из пораженных ногтей.

Рис. 3.2.11. Микроморфология Altemaria sp., выделенного из пораженных ногтей.

Рис. 3.2.12. Микроморфология Aspergillus sp., выделенного из пораженных ногтей.

Рис. 3.2.13. Микроморфология Ulocladium sp , выделенного из пораженных ногтей.

Рис. 3.2.14. Микроморфология Chaetomium sp., выделенного из пораженных ногтей.

Рис 3.2.15 Панель питательных сред для идентификации дерматофитов (слева - культура Т rubrum, справа - Т mentagrophytes var. mterdigitale). Слева направо: среда Сабуро, среда Бакстера, среда Христенсена, кукурузный агар

Следует учесть, что некоторые плесневые грибы, в том числе дерматофиты, в культуре вырастают медленно, за 2-3 нед.

Даже при соблюдении всех правил сбора материала, при хорошем оборудовании лаборатории и высокой квалификации ее персонала число положительных результатов культурального исследования очень невелико. По данным зарубежной литературы, процент положительных исследований не превышает 50.

Процент положительных результатов в лучших отечественных лабораториях едва достигает 30. Таким образом, в 2 из каждых 3 случаев онихомикоза его этиологию установить не удается.