III. Лабораторная диагностика

В лабораторию направляют пораженные паренхиматозные органы, а также сыворотку крови.

Для гистологических исследований направляют от свежих трупов отдельные участки головного мозга (аммониевы рога, мозжечок, продолговатый и средний мозг), кусочки печени, селезенки, почек, стенки предсердия и желудочка сердца, при необходимости материал можно консервировать 10%-м водным раствором формалина. Для ретроспективной диагностики отправляют парные пробы сыворотки крови, для этого в первый раз кровь берут в момент наиболее ярких проявлений клинических признаков (хранят в холодильнике), затем через 21 день отбирают вторую пробу и отправляют парные сыворотки для исследований в лабораторию. При этом используют следующие методы консервации: 1мл 5%-ого раствора формалина на 9мл сыворотки; сухая борная кислота (4% от объема сыворотки); однократное замораживание (до -10˚С). Не консервированная сыворотка пригодна для исследования в течение 6 дней при хранении ее при температуре 4 – 8˚С. Кроме этого для консервации можно использовать раствор Хенкса (содержит антибиотики 1ЕД на 1мл). После этого материал отправляют с нарочным в лабораторию для подтверждения предполагаемого диагноза.

1. Гематологическое исследование – у большинства клинически больных лошадей обнаруживают лейкоцитоз (10,5-18,5 Г/л), нейтрофилию (наличие миелоидных, увеличение юных и палочкоядерных нейтрофилов), увеличение числа эритроцитов (8,5-10,5 Т/л), общего белка (83-96 г/л), СОЭ резко снижена, также могут быть абсолютная и относительная лимфоцитопении (16-23% и 0,6-2,0 Г/л), снижение содержания витамина С до 9,25-17,04 ммоль/л, лизоцимной активности до 16,8-18,3%, анэозинофилия, отсутствие фибрина в сыворотке крови, повышенный билирубин. У переболевших животных отмечается лимфоцитоз (40-55% и 3,8-4,6 Г/л), эозинофилия (6-10%), нормализация уровня общего белка (75-80 г/л), повышение лизоцимной активности до 36-45%, а витамина С – до 20,04-27,45 ммоль/л.

2. Гистологическое исследование – в печени нарушение балочной структуры, гепатоциты загружены жировыми каплями, многие из них с пикнотическими или лизированными ядрами. Фолликулы селезенки редуцированы. Граница между белой и красной пульпой сглажена вследствие выраженной инфильтрации красной пульпы лимфоидными клетками (диффузная пролиферация). В органе уменьшенное количество гемосидерина. В головном мозге выявляют отек, очаговые скопления преимущественно гистиоцитов и полинуклеаров, мелкие кольцевые геморрагии.

При проведении гистологического исследования в головном мозге устанавливают отек субстанции м периваскулярного пространства (обнаруживают включения Носта – Дегена в случае болезни Борна). Для обнаружения антител используют реакции нейтрализации редукции бляшек, ингибиции гемагглютинации, связывания комплемента или иммуноферментным методом.

3. Биопроба – ставят при необходимости. Заражают кроликов, кошек, 7-9-дневных куриных эмбрионов, культуры растущих тканей эмбрионов и почек свиней 10%-й мозговой суспензией клинически больных лошадей, содержащей неклассифицированный вирус размером 80-130 нм, круглой, овальной, реже палочкообразной формы.

Поскольку в странах бывшего СНГ не разработаны надежные и объективные лабораторные методы диагностики, а при постановке биопробы тратится много времени на пассажирование и идентификацию выделенного вируса, то диагноз устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических, гематологических, патоморфологических изменений, характерных для ИЭМЛ.