Тесты на определение экзокринных заболеваний поджелудочной железы животных

Биохимические исследования сыворотки крови. Трипсиноген-активационный пептид. Когда трипсиноген преобразуется в трипсин, неболь­шой пептид, из молекулы трипсиногена отделяется трипсиноген-активационный пептид (ТАП). У здоро­вого животного активация трипсиногена происходит только в тонком отделе кишечника.

Таким образом, у здоровых собак и кошек концентрация ТАП, цирку­лирующего в крови, либо незначительна, либо не вы­является вообще. При панкреатите трипсиноген пре­ждевременно активируется в поджелудочной железе, ТАП попадает в сосудистое русло, где его концентра­ция и повышается.

В клинических испытаниях чувствительность те­ста с определением соотношения ТАП : креатинин мочи и концентрации ТАП в плазме крови у собак с панкреатитом была низкой и мало информативной. Недавно было проведено еще одно исследование с определением концентрации ТАП в плазме и моче с целью диагностики панкреатитау кошек.

Наблюдалось значительное повышение концентрации ТАП в плаз­ме крови у кошек с панкреатитом. Однако концентра­ция ТАП плазмы, похоже, не имеет преимуществ пе­ред определением трипсиноподобной иммунореак­тивности в сыворотке крови у кошек.

Более того, ТАП относительно нестабилен в пробах плазмы и мочи, ис­следование это дорогостоящее и предлагается редко, что делает тест на ТАП плазмы крови менее привлека­тельным методом диагностики заболевания, чем тест с определением трипсиноподобной иммунореактив­ности. Таким образом, использование метода опреде­ления ТАП для диагностики панкреатита у собак и кошек не может быть рекомендовано.

Комплексы ингибитор α₁-протеиназы – трипсин. У здоровых животных лишь минимальное количе­ство трипсина попадает в сосудистое русло. Напротив, при воспалении поджелудочной железы трипсин по­ступает в сосудистое русло, откуда удаляется двумя молекулами, ингибитором α₁-протеиназы и α₂-макро- глобулином.

Ингибитор α₁-протеиназы формирует с трипсином обратимую связь. У здорового живот­ного концентрация комплексов ингибитор α₁-протеиназы - трипсин в сыворотке крови будет низкой или вообще не будет определяться, а при панкреатите следует ожидать повышения концентрации.

В одном опытном исследовании панкреатита у собак концен­трация комплексов ингибитор α₁-протеиназы - трип­син была значительно выше, чем у здоровых собак; степень повышения отражала тяжесть заболевания. Однако у собак со спонтанным панкреатитом увели­чение концентрации комплексов ингибитор α₁-протеиназы - трипсин в сыворотке не наблюдалось, поэ­тому этот метод не подходит для диагностики данного заболевания.

α₂- Макроглобулин. α₂- Макроглобулин - это еще один белок для захва­та преждевременно активированного трипсина. В то время как трипсин обратимо связывается с ингиби­тором а,- протеиназы, связь с α₂-макроглобулином является необратимой, комплексы трипсин — α₂- ма­кроглобулин быстро удаляются ретикулоэндотелиальной системой.

Таким образом, α₂-макроглобулин утилизируется при воспалении поджелудочной же­лезы, и сывороточная концентрация снижается. К со­жалению, измерение α₂-макроглобулина сыворотки крови клинически неинформативно для диагностики панкреатита у собак; польза в отношении исследова­ния данного протеина у кошек пока не выяснена.

Липаза. Тест на активность сывороточной липазы использовал­ся для диагностики панкреатита у человека и собак на протяжении нескольких десятков лет. Однако в обоих случаях было убедительно доказано, что тест на актив­ность сывороточной липазы не является ни точным, ни очень специфичным для панкреатита. Было доказано, что липазу синтезируют и выделяют многие типы кле­ток.

Липазы различных клеток выполняют одинаковые функции, поэтому их нельзя дифференцировать с по­мощью каталитических анализов, которые применя­ются в настоящее время для определения активности сывороточной липазы. Активность липазы сыворотки крови не снижается у собак с экзокринной недостаточ­ностью поджелудочной железы, что свидетельствует о том, что в большинстве своем сывороточная активность липазы возникает в других областях, нежели в ациноз­ных клетках поджелудочной железы.

Многие наруше­ния, вызванные другими, не связанными с поджелу­дочной железой заболеваниями, такими, как почечная и печеночная недостаточность, новообразования, со­провождаются повышением активности сывороточной липазы. Стресс, вызванный повышением температуры, введением преднизолона или дексаметазона, также вы­зывает увеличение активности сывороточной липазы у собак. При этом у одних собак с панкреатитом это уве­личение заметно, а у других его вообще нет либо оно минимально.

В одном исследовании результат теста на активность сывороточной липазы показал специфич­ность к панкреатиту только на 55% и чувствительность на 73%. Так, у собак это исследование можно исполь­зовать только как скрининговый тест, пока диагноз не подтвердится другим, более специфичным тестом. Панкреатит может присутствовать, даже если актив­ность сывороточной липазы находится в норме.

У кошек с искусственно спровоцированным пан­креатитом в одном исследовании было выявлено зна­чительное повышение активности сывороточной ли­пазы. Однако у кошек с естественным панкреатитом такое обычно не наблюдается, следовательно, у кошек активность сывороточной липазы не имеет значения для диагностики панкреатита.

Амилаза. Тест на активность сывороточной амилазы, как и ак­тивность сывороточной липазы, не является специ­фичным для оценки экзокринной функции подже­лудочной железы. У собак с экспериментально спро­воцированным панкреатитом отмечается повышение активности сывороточной амилазы; в то время у од­них собак с естественным панкреатитом также наблю­дается это явление, у других же оно не наблюдается, то есть активность сывороточной амилазы находится в пределах нормы.

Более того, у собак с заболеваниями желудочно-кишечного тракта, не связанными с под­желудочной железой, иногда повышалась активность сывороточной амилазы. Наконец, введение предни­золона и дексаметазона здоровым собакам приводит к снижению активности сывороточной амилазы, в то время как активность сывороточной липазы растет.

В одном исследовании активность сывороточной амила­зы показала у собак специфичность к панкреатиту на 57% и чувствительность на 62% в подтверждение того, что, как и в случае с активностью липазы, определе­ние активности сывороточной амилазы может быть использовано только в скрининг-тесте для выявления панкреатита у собак до тех пор, пока диагноз не будет подтвержден другими тестами.

В одном эксперименте с кошками, у которых был экспериментально вызванный панкреатит, актив­ность сывороточной амилазы понизилась, а у кошек с естественным заболеванием такого не наблюдалось. Следовательно, тест на активность сывороточной амилазы неинформативен для диагностики панкреа­тита у кошек.

Трипсиноподобная иммунореактивность (ТПИ). Ацинарные клетки поджелудочной железы синтези­руют и выделяют трипсиноген, неактивный зимоген протеолитического фермента трипсина. Почти все трипсиногены выделяются в двенадцатиперстную кишку через протоки поджелудочной железы. Однако, небольшое количество высвобождается в сосудистое русло, и его можно измерить с помощью видоспеци­фичных анализов на определение трипсиноподобной иммунореактивности (ТПИ).

У собак и кошек с ЭНПЖ возникает значительное уменьшение количества ацинозных клеток поджелу­дочной железы и соответственно снижение высвобож­дения ферментов поджелудочной железы, включая трипсиноген, и в двенадцатиперстную кишку, и в со­судистую сеть. В результате концентрация трипсина в сыворотке крови понижается. Тест на определение концентрации трипсина в сыворотке крови у собаки, составляющей ≤2,5 мкг/л, является высоко чувстви­тельным и специфичным для диагностики ЭНПЖ у собак; у кошек этот показатель составляет ≤8 мкг/л.

Воспаление поджелудочной железы может приве­сти к усилению высвобождения трипсиногена в сосу­дистое русло. Также при панкреатите преждевремен­но активированный трипсин поступает непосред­ственно в сосудистую сеть, где он быстро связывается ингибиторами протеазы плазмы крови. Как и трипси­ноген, трипсин можно определить с помощью иммунологических исследований (ТПИ), хотя и с гораздо меньшей эффективностью; так что у собак и кошек с панкреатитом общая концентрация трипсина в сыво­ротке может повышаться.

Значительно повышенная сывороточная концентрация трипсина (>50 мкг/л у собак и >100 мкг/л у кошек) высоко специфична для определения панкреатита, но имеет ограниченную чувствительность 30-60%, скорее всего вследствие его короткого периода полувыведения. Тест на кон­центрацию трипсина в сыворотке, пожалуй, самый ценный в плане диагностики ранней стадии спонтан­но возникшего панкреатита у собак и кошек, в то вре­мя как тест на иммунореактивность панкреатической липазы (ИПЛ) будет информативнее по мере разви­тия заболевания.

Иммунореактивность панкреатической липазы (ИПЛ). Самые разные клетки организма синтезируют и вы­деляют липазу. В отличие от неспецифичных ката­литических исследований для измерения активности липазы, иммунологические исследования позволяют провести специфический анализ активности липазы, синтезированной экзокринной системой поджелудоч­ной железы. Недавно были разработаны и одобрены иммунологические исследования для оценки ИПЛ у собак и у кошек; повышение ИПЛ в сыворотке крови наблюдается у собак и кошек в обоих случаях экспе­риментального и спонтанного панкреатита.

ИПЛ в сыворотке крови понижена у собак с ЭНПЖ, что свидетельствует о том, что этот показа­тель специфичен для оценки состояния ацинозных клеток поджелудочной железы. Однако у здоровых собак и собак с ЭНПЖ присутствует несколько боль­шая корреляция показателя ИПЛ, чем показателя ТПИ в сыворотке крови. Это говорит о том, что для диагностики ЭНПЖ предпочтительнее тест с опреде­лением ТПИ.

В исследовании собак с гистологически подтвержденным спонтанным панкреатитом чувстви­тельность теста ИПЛ составила >80%, по сравнению с < 55% при определении активности сывороточной липазы и < 35% для показателя ТПИ в сыворотке кро­ви. Показатель ИПЛ в сыворотке крови значительно выше у собак с экспериментально спровоцирован­ной хронической почечной недостаточностью, чем у здоровых животных.

Однако у большинства собак при почечной недостаточности показатель ИПЛ на­ходится в пределах нормы и не превышает значения, используемого при диагностике панкреатита. Это го­ворит о том, что показатель ИПЛ в сыворотке крови может использоваться в качестве диагностического теста на панкреатит даже у собак с почечной недоста­точностью. Пероральное введение преднизолона не влияет на показатель ИПЛ сыворотки крови.

Первоначальные клинические исследования ИПЛ у кошек также являются перспективными. В группе кошек с экспериментально спровоцированным пан­креатитом наблюдалось первоначальное повышение показателей ИПЛ и ТПИ; однако, повышение пока­зателя ИПЛ продолжалось гораздо дольше, чем ТПИ, что позволяет предположить, что так же, как и у собак, показатель ИПЛ более чувствителен и специфичен при диагностике панкреатита, по сравнению с пока­зателем ТПИ или даже проведением УЗИ брюшной полости.

Таким образом, как у собак, так и у кошек опре­деление ИПЛ в сыворотке крови является самым чувствительным и специфичным тестом для диаг­ностики панкреатита. Такие исследования сейчас проводят только в лаборатории, занимающейся за­болеваниями желудочно-кишечного тракта при Сельхозтехническом университете в штате Техас.

Ссылки и дополнительная литература:
1. Barr SC (1998а) Cryptosporidiosis and cyclosporiasis. In: Infectious Diseases of the Dog and Cat, 2nd edn, ed. CE Greene, pp. 518 - 524. WB Saunders, Philadelphia
2. Barr SC (1998b) Enteric protozoal infections. In: Infectious Diseases of the Dog and Cat, 2nd edn, ed. CE Greene, pp. 482 - 491. WB Saunders, Philadelphia

3. Center SA (1996) Diagnostic procedures for evalu­ation of hepatic disease. In: Strombeck’s Small Animal Gastroenterology, 3rd edn, ed. WG Guilford et. al., pp. 130 - 188. WB Saunders, Philadelphia
4. Gookin JL, Foster DM, Poore MF, Stebbins ME and Levy MG (2003) Use of a commercially available culture system for diagnosis of Tritrichomonas foetus infection in cats .Journal of the American Veterinary Medical Association 222,1376 - 1379

5. Johnston KL (1999) Small intestinal bacterial over­growth. Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice 29, 523 – 550
6. Lund EM and Klausner JS (1995) Clinical epidemiology for the veterinary practitioner: the diagnostic process. In: Kirk’s Current Veterinary Therapy, XII edn, ed. JD Bonagura, pp. 7 - 11. WB Saunders, Philadelphia

7. Mansfield CS and Jones BR (2000) Plasma and uri­nary trypsinogen activation peptide in healthy dogs, dogs with pancreatitis and dogs with other systemic diseases. Australian Veterinary Journal!8, 416 – 422
8. Neiger R and Simpson KW (2000) Helicobacter infec­tion in dogs and cats: facts and fiction. Journal of Veterinary Internal Medicine 14, 125 - 133

9. Simpson KW, Fyfe J, Cornetta A, Sachs A, Strauss-Ayali D, Lamb SV and Reimers TJ (2001) Subnormal concentra­tions of serum cobalamin (Vitamin B12) in cats with gastro­intestinal disease. Journal of Veterinary Internal Medicine 15, 26-32

10. Steiner JM (1998) Clinical endocrinology of the gas­trointestinal tract. In: BSAVA Manual of Small Animal Endocrinology, 2nd edn, ed. AG Torrance and CT Mooney, pp. 173 - 178. BSAVA Publications, Cheltenham

11. Steiner JM (1998) Clinical endocrinology of the gas­trointestinal tract. In: BSAVA Manual of Small Animal Endocrinology, 2nd edn, ed. AG Torrance and CT Mooney, pp. 173 - 178. BSAVA Publications, Cheltenham
12. Steiner JM (2003) Diagnosis of pancreatitis. Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice 33, 1181 – 1195.