Определение аминного азота иодометрическим методом

Метод основан на способности аминокислот и различных пептидов образовать комплексные растворимые соединения с медью, определяемой йодометрическим методом.

Сущность метода в следующем: к определенному количеству испытуемого раствора прибавляется при слабощелочной реакции избыток суспензии фосфорнокислой меди в боратном буферном растворе, в результате чего после взбалтывания раствора образуются медные соли большинства аминокислот. Затем избыток фосфата меди отфильтровывается, и в прозрачном растворе после добавления СН₃СООН и KI определяется медь объемным способом по выделяющемуся йоду путем титрования слабым Na₂S₂O₃. При этом химическая реакция:

2Cu(CH₃COO)₂ + 4KI = 2CuI₂ + I₂↓ + 4CH₃COOH.

Каждый мл 0,01 н. Na₂S₂O₃ соответствует 0,28 мг аминного азота.

Цель работы: определить суммарное содержание аминного азота в растительном объекте (семенах или бобах).

Оборудование: штатив с центрифужными пробирками; пипетка градуированная на 5 мл и на 10 мл – по 1 шт.; коническая колба на 100 мл – 1 шт.; стеклянная воронка для фильтрования – 1 шт.; фильтровальная бумага или фильтры марки «синяя лента»; стеклянная палочка – 1 шт.; химический стакан (V = 50-100 мл) – 2 шт.

Реактивы:

- растительный объект (горох, бобы сои или фасоли, измельчённые в кофемолке);

- приготовление растворов:

1) раствор хлорной меди – 2,73 г в 100 мл воды;

2) трехзамещенный фосфат натрия: 12,9 г двухосновного фосфата натрия растворяют в 100 мл прокипяченной и охлажденной воды без CO₂, добавляют 1,44 г NaOH и после растворения доводят объем водой до 200 мл;

3) боратный буфер: 5,72 г буры растворяют в 150 мл воды, добавляют 10 мл 1 н. HCl и доводят объем водой до 200 мл;

4) суспензия фосфорнокислой меди: 1 объем хлорной меди добавляют к 2 объемам второго реактива и хорошо перемешивают, после чего приливают 2 объема буферной смеси (3 реактив);

5) раствор тимолфталеина: 0,05 г растворяют в 20 мл 50% раствора C₂H₅OH;

6) 0,01 н. раствор Na₂S₂O₃;

7) 1% раствор крахмала (раствор прокипятить).

Ход работы.1. Навеску измельченных семян в 200 мг помещают в центрифужную пробирку и добавляют 5 мл 0,2 н. раствора NaОН, приготовленного на 20% растворе этилового спирта.

2. Содержимое пробирки центрифугируют в течение 30 мин. при 3 тыс.об/мин.

3. После центрифугирования осадок вновь обрабатывают 5 мл 0,2 н. раствора NaОН и опять центрифугируют в течение 10 мин.

4. Все надосадочные жидкости объединяют.

5. Для определения аминного азота берут 5 мл вытяжки, которую помещают в мерную колбу на 25 мл, добавляют 2 капли тимолфталеина и 10 мл смеси, состоящей из взвешенного осадка фосфата меди в боратном растворе.

6. Содержание колбы доводят до метки дистиллированной водой, хорошо встряхивают и фильтруют через плотный фильтр (марка «синяя лента») или центрифугируют.

7. Из центрифугата или фильтрата берут по 5-10 мл в коническую колбу на 100 мл, подкисляют 0,25-0,5 мл ледяной уксусной кислоты СН₃СООН, добавляют 0,2-0,4 г KI.

8. Выделившийся йод титруют 0,01 н. свежеприготовленным раствором Na₂S₂O₃, приливая к концу титрования 4-5 капель крахмала до исчезновения типично синей окраски.

Расчёты.Число мл 0,01 н. раствора Na₂S₂O₃ умножают на 0,28, в результате чего получают 1 мг аминного азота во взятой части испытуемой жидкости. Результаты можно выразить в процентах, учитывая объём вытяжки и вес навески. При применении данного способа особое внимание обратить на то, чтобы центрифугат или фильтрат был прозрачным, так как присутствие малейшего осадка фосфорнокислой меди даёт преувеличение цифры титрования.