Определение массовой концентрации крахмала в семенах спектрофотометричесим методом

Метод основан на свойстве крахмала растворяться в растворе салициловой кислоты. Затем крахмал определяют по интенсивности синего окрашивания с реактивом I₂ в КI.

Цель работы: количесвтенно определить содержание крахмала в растительном объекте (картофель, бобы сои, фасоли, горохе).

Оборудование: спектрофотометр с кюветами (длина оптического пути – 10 мм), мерная колба (V = 100 мл) – 1 шт.; пипетки градуированные на 20 мл – 1 шт.; круглодонная колба на 50-100 мл с обратным воздушным холодильником (резиновая пробка с длинной прямой стеклянной трубкой) – 2 шт.; водяная баня – 1 шт.; мерный цилиндр на 100 мл – 1 шт.; весы (с точностью – 0,1 г) – 1 шт.; стеклянная воронка для фильтрования – 1 шт.; бумажные фильтры «синяя лента»; стеклянная палочка – 1 шт.; химический стакан (V = 50-100 мл) – 2 шт.

Реактивы: - растительный объект (картофель, бобы сои, фасоли, горох).

- растворы: 1) раствор салициловой кислоты: 2,5 г кислоты растворить в 25 мл 96% этилового спирта, затем довести в мерной колбе до 1 л дистиллированной водой. Если появятся хлопья, то раствор нагреть на водяной бане до полного растворения салициловой кислоты; 2) раствор I₂ в KI: 200 мг йодида калия растворяют в 2 мл дистиллированной воды, прибавляют туда 100 мг кристаллического йода и растворяют его. После полного растворения доливают дистиллированную воду и доводят в мерном цилиндре до 90 мл. Йод плохо растворяется, но нагревать его нельзя. Лучше брать мелкие кристаллики йода. Хранить в темной склянке; 3) 0,1 моль/л раствор соляной кислоты HCl.

Ход работы.1. 300 мг навески (сухой, тонко измельченной в кофемолке), помещают в мерную колбу на 100 мл и добавляют 20 мл салициловой кислоты.

2. В колбу вставляют пробку с обратным холодильником, помещают на кипящую водяную баню на 45 мин. При этом необходимо 3-4 раза взболтать содержимое колбы.

3. Через 45 мин. содержимое колбы охлаждают, переносят в мерный цилиндр и доводят объём раствором салициловой кислоты до 100 мл.

4. Затем колбу вновь нагревают на кипящей бане и в горячем состоянии вытяжку фильтруют через складчатый фильтр марки «синяя лента».

5. 10 мл фильтрата переносят в мерную колбу на 100 мл, прибавляют 70 мл дистиллированной воды, 15 мл 0,1 н. раствора соляной кислоты HCl, 2 мл реактива I₂ в КI, доводят водой до метки и определяют оптическую плотность полученного раствора (А) на спектрофотометре с красным светофильтром (605-730 нм).

6. Находят оптическую плотность раствора (см. Приложение. Работа на спектрофотометре). Для расчёта содержания крахмала пользуются калибровочным графиком.

7. Одновременно с опытной пробой готовят растворы для построения градуировочного графика.

Построение калибровочной кривой: 100 мг крахмала заливают 20 мл раствора салициловой кислоты и нагревают в течение 45 мин. на водяной кипящей бане, после охлаждения доливают до 100 мл салициловой кислотой. Это исходный раствор, который содержит в 1 мл 1 мг крахмала.

Таблица 10. Приготовление стандартных растворов крахмала

Содержимое колб доводят до метки, и определяют оптическую плотность (А) при красном светофильтре (605-730 нм).

ЛИТЕРАТУРА

1. Большой практикум «Биохимия». Лабораторные работы: учеб. пособие / сост. М.Г. Кусакина, В.И. Суворов, Л.А. Чудинова; Перм. гос. нац. исслед. ун-т. – Пермь, 2012. – 148 с.

2. Девятин В.А. Методы химического анализа в производстве витаминов. – М.: Медицина, 1964. – 360 с.

3. Коренская И.М., Ивановская Н.П., Измалкова И.Е. Лекарственные растения и лекарсвенное сырье, содержащее флавоноиды, кумарины, хромоны. Воронеж, 2007. – 78 с.

4. Корулькин Д.Ю. Природные флавоноиды. Новосибирск: Академическое изд-во «Тео», 2007. – 232 с.

5. Лазыкина Л.Г., Пустовит С.О., Кулишов С.А., Лазыкина А.Ю. Исследование ферментативной активности амилазы слюны // Сборник КГУ «Естественные науки». – Калуга: КГУ им. К.Э. Циолковского, 2019. – С. 23-27.

6. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия : учеб. пособие /под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. – СПб. : СпецЛит, 2004. – 765 с.

7. Носов А.М. Лекарственные растения. М. : ЭКСМО – Пресс, 2001. – 348 с.

8. Семенов А.А. Очерк химии природных соединений. Новосибирск: Наука, 2000. – 664 с.

9. Кожакин П.А. Большой лабораторный практикум: учебно-практическое пособие / П.А. Кожакин: БГТИ (филиал) ОГУ – Бузулук, 2013. – 117 с.

10. Учебно-методическое пособие к практикуму по биологической химии для студентов стоматологического факультета / А.Д. Таганович и др. – Минск: МГМУ, 2012. – 140 с.

11. Общая и неорганическая химия. Органическая химия. Биологическая химия: учебное пособие / В.А. Карпов, В.М. Ларионова, К.Л. Анфилов и др. – Калуга: КГПУ им. К.Э. Циолковского, 2005. – 100 с.

12. Шапиро Д.К. Практикум по биологической химии / Под ред. акадамика АН БССР А.С. Вечера. – 2-е изд., перераб. и доп. – Минск: Вышэйшая школа, 1976. – 286 с.

13. Храмов В.А., Комарова В.И., Спивак М.Е. Практикум по биологической химии (часть 1). – Волгоград, 2002. – 24 с.

14. Кожакин П.А. Большой лабораторный практикум: учебно-практическое пособие / П.А. Кожакин: БГТИ (филиал) ОГУ-Бузулук, 2013. – 117 с.

15. Факторы, влияющие на накопление дубильных веществ. [Электронный ресурс]: Режим доступа: http://lektsii.org/3-12912.html

16. Шлейкин А.Г., Скворцова Н.Н., Бландов А.Н. Биохимия. Лабораторный практикум. Часть 3. Углеводы. Липиды: Учеб. пособие. – СПб.: Университет ИТМО, 2015. – 64 с.