Количественное определение молочной кислоты

Одна из основных функций углеводов в обмене веществ различных видов организмов – энергетическая. В процессе аэробного дыхания через ряд промежуточных продуктов углеводы превращаются в пировиноградную кислоту, которая после декарбоксилирования окисляется до СО₂ и Н₂О. В анаэробных условиях окисление заканчивается образованием молочной кислоты.

При различных видах брожения (молочнокислом, пропионовокислом, спиртовом и др.) превращение углеводов заканчивается образованием различных органических кислот, спиртов и некоторых других продуктов.

Колориметрический метод определения содержания молочной кислоты связан с образованием жёлтого окрашивания в результате цветной реакции молочной кислоты с хлоридом железа, интенсивность которого возрастает пропорционально увеличению концентрации кислоты.

Цель работы: опеределить содержание молочной кислоты в продуктах брожения.

Оборудование: спектрофотометр, кюветы с длиной оптического пути 10 мм; мерная колба (V = 100 мл) – 6 шт.; пипетки на 1 мл, 2 мл и 10 мл – по 1 шт.; стеклянная воронка для фильтрования – 1 шт.; фильтровальная бумага или фильтры; пробирки; стеклянная палочка – 1 шт.; химический стакан (V = 50-100 мл) – 2 шт.

Реактивы: молочная сыворотка; сыворотка крови; рассол квашеной капусты (огурцов); 10% раствор хлорида бария; 0,66 н. раствор гидроксида натрия; 22% раствор сульфата цинка; 1% раствор хлорида железа (III); молочная кислота.

Ход работы.1. К 5 мл сыворотки (рассола) прибавляют 2 мл 10% раствора ВаСl₂, 2 мл 0,66 н. раствора NaОН и 1 мл 22% раствора ZnSO₄. Реактивы вводят очень быстро, обязательно перемешивая раствор в течение не менее 30 с после добавления каждого реактива.

2. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр.

3. 1 мл прозрачного фильтрата переносят в мерную колбу объёмом 100 мл, разбавляют дистиллированной водой до 100 мл и перемешивают.

4. Отбирают 10 мл раствора, добавляют к нему 1 мл 1% раствора FeCl₃, содержимое перемешивают.

5. Определяют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре (см. Приложение. Работа на спектрофотометре) с синим светофильтром (λ = 435-480 нм).

6. Содержание молочной кислоты в фильтрате определяют по калибровочному графику, который строят на основе стандартных растворов, приготовленных разбавлением молочной кислоты известного состава в соответствии с табл. 9:

Таблица 9. Приготовление стандартных растворов молочной кислоты