Опыт 1. Определение изоэлектрической точки казеина.
Ход работы.Выделение казеина из молока.
К 2 мл молока добавляют 2 мл дистиллированной воды и 2 капли 10-процентной уксусной кислоты. Образуется осадок казеина, который отфильтровывают. Фильтрат отбрасывают, а осадок казеина осторожно снимают с фильтра стеклянной палочкой и помещают в чистые пробирки.
Определение изоэлектрической точки казеина.
Для определения изоэлектрической точки казеина в 7 сухих пробирок наливают нужные реактивы в количествах, указанных в табл. 6. При смешивании растворов в каждой пробирке устанавливается определенная концентрация ионов водорода. Содержимое пробирок хорошо перемешивают. Через 5-10 мин во всех пробирках появляется осадок (помутнение). Наибольшее количество осадка наблюдается в той пробирке, рН которой соответствует изоэлектрической точке данного белка (см. табл. 1).
Таблица 1. Приготовление растворов
| Количество 0,2 М CH3COOH, мл | Количество H2O, мл | Количество 0,4-процентного раствора казеина в 0,2 М CH3COONa, мл | рН смеси | Степень помутнения |
| 1,6 | 0,4 | 0,2 | 3,8 | |
| 0,8 | 1,2 | 0,2 | 4,1 | |
| 0,4 | 1,6 | 0,2 | 4,4 | |
| 0,2 | 1,8 | 0,2 | 4,7 | |
| 0,1 | 1,9 | 0,2 | 5,0 | |
| 0,06 | 1,94 | 0,2 | 5,3 | |
| 0,03 | 1,97 | 0,2 | 5,6 |
Опыт 2. Качественный анализ казеина.
Фосфопротеиды представляют собой сложные белки, состоящие из простого белка и небелковой части – фосфорной кислоты. Фосфорная кисло та связана с белком через гидроксильную группу оксиаминокислот – серина и треонина. К этой группе белков относятся казеиноген молока, вителлин яичного желтка, ихтулин икры и некоторые другие. Фосфопротеиды служат одним из питательных материалов для развития эмбрионов.
Ход работы.Выделение казеина из молока описано в опыте 1.
Гидролиз казеина.
В пробирку помещают выделенный из молока казеин и приливают 2 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия. Кипятят 10-15 мин. на кипящей водяной бане с обратным воздушным холодильником, затем охлаждают пробирку и проводят реакцию на продукты гидролиза.
Обнаружение белка.
Белок обнаруживают биуретовой реакцией. В пробирку к трём каплям гидролизата добавляют одну каплю 1%-ного раствора сульфата меди. Появляется розово-фиолетовое окрашивание.
Обнаружение фосфата.
Оставшийся гидролизат подкисляют несколькими каплями10%-ного раствора азотной кислоты в присутствии 1-2 капель фенолфталеина (до обесцвечивания) и отфильтровывают в сухую пробирку.
К 5 каплям фильтрата приливают 20 капель молибденового реактива и кипятят несколько минут. Жидкость окрашивается в жёлтый цвет, а затем при охлаждении выпадает жёлтый осадок фосфорно-молибденового аммония, указывающий на присутствие фосфата в гидролизате:
H3PO4+12(NH4)2MoO4+ 21HNO3→(NH4)3(PO4⋅12MoO3) + 21NH4NO3 + 12H2О
фосфорно-
молибденовый
аммоний
Дата добавления: 2021-10-28; просмотров: 623;
Поиск по сайту
Узнать еще
- I. Определение и структура методов обучения.
- I. Определение условий выполнения рукописи.
- I. Определение, виды радиоактивности, радиоактивные семейства
- Mатематическое определение ОС.
- V. Методы организации деятельности и формирования опыта общественного поведения (методы упражнения).
- А) Деградация почв и определение ее скорости
- А) Опыт по определению силы Ампера
- А. Уравнения движения точки в декартовых координатах
Публикации по технике и механике
Публикации по биологии
Публикации по информатике
Публикации по строительству
Публикации по физике
Публикации по химии
Публикации по электронике
Публикации по искусству
Публикации по истории
Публикации по медицине
