Опыт 1. Определение изоэлектрической точки казеина.

Ход работы.Выделение казеина из молока.

К 2 мл молока добавляют 2 мл дистиллированной воды и 2 капли 10-процентной уксусной кислоты. Образуется осадок казеина, который отфильтровывают. Фильтрат отбрасывают, а осадок казеина осторожно снимают с фильтра стеклянной палочкой и помещают в чистые пробирки.

Определение изоэлектрической точки казеина.

Для определения изоэлектрической точки казеина в 7 сухих пробирок наливают нужные реактивы в количествах, указанных в табл. 6. При смешивании растворов в каждой пробирке устанавливается определенная концентрация ионов водорода. Содержимое пробирок хорошо перемешивают. Через 5-10 мин во всех пробирках появляется осадок (помутнение). Наибольшее количество осадка наблюдается в той пробирке, рН которой соответствует изоэлектрической точке данного белка (см. табл. 1).

Таблица 1. Приготовление растворов

Количество 0,2 М CH₃COOH, мл	Количество H₂O, мл	Количество 0,4-процентного раствора казеина в 0,2 М CH₃COONa, мл	рН смеси	Степень помутнения
1,6	0,4	0,2	3,8
0,8	1,2	0,2	4,1
0,4	1,6	0,2	4,4
0,2	1,8	0,2	4,7
0,1	1,9	0,2	5,0
0,06	1,94	0,2	5,3
0,03	1,97	0,2	5,6

Опыт 2. Качественный анализ казеина.

Фосфопротеиды представляют собой сложные белки, состоящие из простого белка и небелковой части – фосфорной кислоты. Фосфорная кисло та связана с белком через гидроксильную группу оксиаминокислот – серина и треонина. К этой группе белков относятся казеиноген молока, вителлин яичного желтка, ихтулин икры и некоторые другие. Фосфопротеиды служат одним из питательных материалов для развития эмбрионов.

Ход работы.Выделение казеина из молока описано в опыте 1.

Гидролиз казеина.

В пробирку помещают выделенный из молока казеин и приливают 2 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия. Кипятят 10-15 мин. на кипящей водяной бане с обратным воздушным холодильником, затем охлаждают пробирку и проводят реакцию на продукты гидролиза.

Обнаружение белка.

Белок обнаруживают биуретовой реакцией. В пробирку к трём каплям гидролизата добавляют одну каплю 1%-ного раствора сульфата меди. Появляется розово-фиолетовое окрашивание.

Обнаружение фосфата.

Оставшийся гидролизат подкисляют несколькими каплями10%-ного раствора азотной кислоты в присутствии 1-2 капель фенолфталеина (до обесцвечивания) и отфильтровывают в сухую пробирку.

К 5 каплям фильтрата приливают 20 капель молибденового реактива и кипятят несколько минут. Жидкость окрашивается в жёлтый цвет, а затем при охлаждении выпадает жёлтый осадок фосфорно-молибденового аммония, указывающий на присутствие фосфата в гидролизате:

H₃PO₄+12(NH₄)₂MoO₄+ 21HNO₃→(NH₄)₃(PO₄⋅12MoO₃) + 21NH₄NO₃ + 12H₂О