Сущность фотометрических методов.

При фотометрических определениях интенсивность окраски или степень мутности определяемого раствора сравнивают с окраской раствора, концентрация которого известна.

Для того, чтобы вещество можно было определить фотометрически, проводят цветную реакцию и получают окрашенный раствор. Для этой цели применяют реакции окисления-восстановления, комплексообразования, органического синтеза. Цветные реакции, применяемые в фотометрии, должны удовлетворять следующим требованиям.

1. Реакция получения окрашенного раствора должна протекать с большой скоростью.

2. Полученное окрашенное соединение должно обладать достаточно интенсивной окраской; чем интенсивнее окраска, тем чувствительнее метод анализа.

3. Окраска должна быть устойчивой во времени и малочувствительной к свету. Интенсивность окраски не должна изменяться с изменением температуры и рН раствора. Если рН раствора оказывает заметное влияние на интенсивность окраски, проведение цветной реакции должно происходить при строго определенной величине рН.

4. Интенсивность окраски должна быть прямо пропорциональна концентрации окрашенного соединения.

5. Раствор данного окрашенного соединения должен подчиняться закону Ламберта-Бэра. Чтобы уменьшить отклонения от закона Ламберта-Бэра, необходимо работать в оптимальных условиях, выбрав подходящие реагент и способ приготовления окрашенных испытуемого и стандартного раствора.

Для того, чтобы приготовить окрашенный раствор известной концентрации, применяют так называемые стандартные растворы, которые содержат точно известное количество определяемого вещества. Обычно концентрация стандартного раствора выражается в миллиграммах вещества в миллилитре раствора (мг/мл). Стандартные растворы готовят обычно по точно взятой навеске, если взвешиваемое вещество удовлетворяет требованиям, предъявляемым к веществам, из которых можно приготовить растворы точной концентрации. Для приготовления стандартных растворов с меньшей концентрацией (стандартный ряд) отбирают определенный объем (аликвоту) приготовленного раствора, переносят в мерную колбу и доводят водой до метки. Если невозможно приготовить раствор по точной навеске, готовят раствор по приблизительной навеске. В этом случае готовят гораздо более концентрированный раствор, чем это необходимо для фотометрических определений. Растворы нужной концентрации готовят разбавлением приготовленного раствора.

При приготовлении окрашенных растворов необходимо придерживаться следующих правил.

1. К стандартному и испытуемому растворам прибавляют одинаковые реактивы в одной и той же последовательности и в одних и тех же количествах.

2. Окрашенные растворы, стандартный и испытуемый, готовят одновременно, так как часто интенсивность окраски изменяется со временем.

3. Окрашенные растворы, стандартный и испытуемый, должны быть одинакового объема. Поэтому окрашенные растворы готовят в мерных колбах или в градуированных пробирках.

4. Окраску испытуемого и стандартного раствора сравнивают в одинаковых условиях.