Построение градуировочной (калибровочной) кривой

Для того, чтобы по величине оптической плотности данного раствора найти его концентрацию, необходимо построить калибровочную кривую, которая показывает зависимость оптической плотности раствора от количества вещества. Для построения градуировочной кривой готовят ряд растворов с известным содержанием вещества (для этого берут разные количества стандартного раствора). Измеряют оптические плотности всех растворов и строят кривую, откладывая по оси абсцисс известные концентрации, а по оси ординат – соответствующие им значения оптической плотности.

По градуировочной кривой определяют концентрацию вещества в исследуемом растворе. Для этого готовят раствор определяемого вещества по той же методике, по которой готовились стандартные растворы для построения калибровочной кривой. Необходимо точно соблюдать количество и порядок прибавления реактивов. Раствор готовится в мерной колбе того же объема. Измерения на приборе проводятся через такой же промежуток времени после приготовления окрашенного раствора, как измерения при построении калибровочной кривой. В некоторых случаях (например, при определении аммиака с помощью реактива Несслера) необходимо точно по часам отсчитывать время, прошедшее после приготовления окрашенного раствора. Раствор наливают в ту же кювету, для которой построена калибровочная кривая, и включив тот же светофильтр, определяют оптическую плотность раствора. Затем по ней находят концентрацию определяемого вещества, соответствующую данной оптической плотности. Градуировочную кривую часто проверяют.

При проведении цветных реакций и построении калибровочных кривых необходимо помнить следующее:

1. Измерение поглощения следует проводить в дополнительной для цветной реакции области спектра. Так, если при реакции раствор окрашивается в желтый цвет, нужно измерять поглощение этим раствором синего света, т.е. выбрать необходимую длину волны или соответствующий светофильтр.

2. Исследовать цветную реакцию лучше всего в максимуме поглощения – этим достигается наибольшая чувствительность. Если положение максимума неизвестно, его следует определить. Такие предосторожности гарантируют получение хороших результатов даже на малочувствительном приборе.

3. В кювете с контрольным раствором обязательно должны содержаться все компоненты, кроме исследуемого вещества.

4. Контрольный раствор должен быть приготовлен очень тщательно, поскольку от этого зависит получение правильных результатов.

5. Если зависимость линейна,для получения хорошей градуировочной кривой нужно не менее пяти точек.Для нелинейной кривой их нужно существенно больше. Построение кривой позволяет исключить точки, поглощение для которых получено ошибочно.

6. Измерение концентрации необходимо проводить минимум трижды и на кривую наносить все значения, а не их среднюю величину. Такой способ построения наглядно показывает точность определения концентрации по полученной градуировочной кривой. Кроме того,+ он позволяет сразу обнаружить неправильные измерения по их сильному отклонению от кривой. На рисунке показаны этапы построения калибровочной кривой.

7. Калибровочные кривые, полученные с реагентами разных партий, как правило, не совпадают. Поэтому при смене реагента градуировочную кривую надо получить заново.

8. Наилучшая кривая, проведенная по всем экспериментальным точкам, не обязательно должна проходить через нуль. Это связано с тем, что для поглощающего контрольного раствора практически невозможно получить точно такое же соотношение всех компонентов, как для образца.