Методы разделения клеток.

Известны приемы, которые позволяют добиться разделения клеток иммунной системы на основные популяции. Фагоциты можно выделить, ис­пользуя их способность прикрепляться к поверхности пластика. Пропускание исходной взвеси через колонку с найлоновой ватой сильно обогащает популяцию лимфоцитов Т-клетками. Обычно препарат лимфоцитов получают, центрифугируя клетки над раствором фиколла; лимфоциты при этом отделяются от других лейкоцитов, имеющих более высокую плавучую плотность.

Однако более эффективное разделение удается провести с помощью широкого набора моноклональных антител, направленных к специфическим дифференцировочным антигенам, которые экспрессируются на поверхности разных типов клеток.

Рис.31. Основные методы разделения клеток, нагруженных специфическими антителами.

Клетки, окрашенные флуоресцирующими антителами, анализируются в проточном цитофлуориметре. После того как клетка минует лазерный луч, струя жидкости разбивается на мельчайшие капли, каждая из которых содержит одну клетку. Для разделения окрашенной клеточной популяции капли, содержащие клетки, дающие определенный флуоресцентный сигнал, заряжаются и с помощью электрического поля отклоняются от струи в подходящий коллектор - отсюда и название этого прибора клеточный сортер.

Клетки, несущие антитела, можно выделить и методом пэннинга на чашках, нагруженных антителами к иммуноглобулинам. Другой метод основан на том, что В-лимфоциты образуют розетки - комплексы с эритроцитами, нагруженными антителами к иммуноглобулинам. Розетки легко отделить от несвязавшихся клеток центрифугированием. Данные методы часто применяются для разделения лимфоцитов человека на популяции.

Рис. 32. Разделение В- и Т-лимфоцитов из миндалины человека с помощью клеточного сортера. После окрашивания конъюгированными с флуоресцеином анти-Ig; живые клетки анализировали методом проточной цитофлуориметрии и получили представленную гистограмму.