Исследование клеточного иммунитета.

К иммунокомпетентным клеткам относят лимфоциты и макрофаги (моноциты и тканевые макрофаги). По своему происхождению и функциям лимфоциты подразделяют на Т-клетки (тимусзависимые) и В-клетки (формирующиеся в костном мозге и лимфоидных тканях). В популяции Т-лимфоцитов по функциональному предназначению различают следующие субпопуляции: киллеры («клетки-убийцы», разрушители антигенов), хелперы (помощники - регуляторы иммуногенеза), супрессоры (подавляют избыточ­ную активность Т- и В-клеток). Основной функцией В-лимфоцитов является продуцирование антител.

Определение количества Т-лимфоцитов основано на их свойстве образовы-вать комплекс (так называемую розетку) с эритроцитами (Е) барана. Поэтому Т-лимфоциты называют Е-розеткообразующими клетками (Е-РОК). Методика выделения Е-РОК предусматривает проведение инкубации. Если же лимфоциты без инкубации активно соединяются с эритроцитами барана, то их характеризуют как Т-«активные» клетки (Еа=РОК). Помимо этих субпопуляций различают теофиллинчувствительные и теофиллинрезистентные лимфоциты. Теофиллинчувствительные лимфоциты - это лимфоциты, не взаимодействующие с эритроцитами барана в присутствии теофиллина. Это явление связано с наличием на поверхности Т-супрессоров рецепторов, блокируемых теофиллином, поэтому комплексы с эритроцитами не образуются. Т-хелперы аналогичных рецепторов не имеют и обозначаются как теофиллинрезистентные лимфоциты. Для популяции В-лимфоцитов (ЕАС-РОК) характерно образование комплексов с эритроцитами мыши. В норме содержание в крови Т-лимфоцитов -(53,6±1,7)% (40-67%), «активных» Т -лимфоцитов - 22-39% (30,8±1,1%), В-лимфоцитов - 16-36% (25,0±1,2%), а соотношение Т- супрессоров к Т-хелперам в норме 1:3.

Помимо исследования количественных параметров, крайне важно оценить функциональную активность иммуноцитов. Наиболее распространенным методом оценки Т-системы является реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ). Метод основан на способности сенсибилизированных лимфоцитов под влиянием антигена іn vіtro выделять биологически активные субстанции (лимфокины), одним из свойств которых является торможение миграции лейкоцитов по капилляру. В качестве антигена используют митогены растительного происхождения ФГА (фитогемагглютинин) или КонА (конканавалин А), а также различные аллергены, применяемые для внутрикожных проб. Для диагностики наличия антинуклеарных антител применяют РТМЛ с нативной ДНК. Результаты РТМЛ с ФГА и КонА отра­жают косвенным образом общую функциональную активность Т-клеток, а применение аллергенов или тканевых антигенов позволяет оценить специфическую сенсибилизацию к таковым. В норме РТМЛ с ФГА должна быть (40,б±1,8)% (20-60%), а с КонА - (б9,1±1,7)% (40-76%) (табл. 1).

табл. 1.

Исследование гуморального иммунитета.

Эти исследования характеризуют функциональную активность В-звена иммунитета. Наиболее распространенным методом является определение количества иммуноглобулинов 3 основных классов (А, М, G) методом радиальной иммунодиффузии в геле. В норме содержание иммуноглобу-линов класса А - (1,9*0,008) г/л (1,26-2,5); класса М - (1,15*0,06) г/л (0,65— -1,65); класса G - (11,5*0,5) г/л (7,50-15,46). Иммуноглобулин класса D обычно не определяют из-за неясности до конца его биологической роли. Для определения иммуноглобулина Е (крайне важный тест при диагностике аллергии) требуется комплекс оборудования и реактивов радиоиммунного или иммуноферментного анализа. Поэтому этот тест пока не получил широкого распространения.

Весьма информативным и широко применяемым методом является определение количества циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), представляющих собой растворимые комплексы «антиген-антитело». При различных патологических процессах ЦИК могут приводить к повреждению мембранных структур организма. Данный тест является одним из основных в диагностике аутоиммунных заболеваний. Определяют количество ЦИК при помощи реакции осаждения полиэтиленгликолем с последующим спектрофо-тометрированием. В норме степень пропускания лучей, т.е. уровень ЦИК, не ниже 90-95%.

Исследование неспецифической резистентности организма.

Факторы системы неспецифической защиты не связаны непосредственно с иммунитетом. Реактивность данной системы не дифференцирована по отно-шению к конкретному антигену и направлена против любых инфекционных и неинфекционных агентов. Одним из ведущих факторов является способ-ность к фагоцитозу нейтрофилов и макрофагов. Это свойство фагоцитов оценивают іn vіtro по их активности связывания и поглощения стафилококка. Определяют следующие параметры: фагоцитарный показатель (процент фагоцитов из числа сосчитанных нейтрофилов - у здоровых лиц равный 40-80%), фагоцитарное число (среднее число микробов, поглощенных одним нейтрофилом,- в норме у взрослых - 4-9) и показатель завершенности фагоцитоза (отношение количества переваренных микробов к общему числу поглощенных).

Важными гуморальными факторами неспецифической резистентности являются лизоцим - в норме (0,005*0,019) г/л и комплемент, титр которого определяют по его гемолитической способности (в норме - 40-80 гемолити­ческих единиц).

Оценка результатов иммунологических исследований.

Накопленный опыт применения иммунологических методов в клинической практике позволяет сформулировать некоторые правила оценки иммунограмм. Однозначным представияется то, что никогда не следует рассматривать отдельно какие-либо параметры иммунитета. Необходимо комплексное изучение клеточного и гуморального звеньев иммунитета, а также факторов неспецифической защиты. Несомненное значение следует придавать только значительным отклонениям от нормы.

Прежде всего следует рассмотреть состояния, три которых перечисленные выше основные параметры иммунограммы могут превышать нормальный размах колебаний. Как правило, любое инфекционное заболевание, особенно бактериальной этиологии, сопровождается существенным ростом практически всех показателей иммунной и несцепифической защиты (особенно количества Т-клеток, их функциональной активности, увеличение содержания иммуноглобулинов, причем чаще всего класса G, усиление фагоцитирующей способности нейтрофилов). Рост показателей начинается в конце периода разгара и достигает, как правило, максимума в период поздней реконвалес-ценции. При помощи РТМЛ можно выявить сенсибилизацию к какому-либо бактериальному антигену и тем самым способствовать установлению этиологии инфекционного процесса, например пневмонии.

В отношении вирусных инфекций следует заметить, что многие из них протекают, наоборот, на фоне умеренного снижения иммунной защиты, постепенно восстанавливающейся в процессе выздоровления. Естественно, что данная закономерность характерна лишь для пациентов с нормальной реакцией на возбудитель, болезнь у которых протекает в обычном варианте с благоприятным, как правило, исходом.

Следует отметить, что повышение показателей иммунитета происходит при различных аллергиях, причем рост количественных параметров клеточного иммунитета может сопровождаться снижением функциональной активности или нарушением состава субпопуляций, что по сути скорее является иммунодефицитным состоянием (табл. 2). Увеличение количества ЦИК в крови не является положительным прогностическим показателем и встречается чаще всего при аутоиммунных заболеваниях. Необходимо наряду с этим помнить, что чрезмерное увеличение количества лимфоцитов (особенно В-клеток) может наблюдаться при хроническом лимфолейкозе, болезни Вальденстрема. Избыточное увеличение содержания иммуноглобулинов, чаще всего классов М и G, встречается при парапротеинемиях (в частности, при миеломной болезни). Увеличение содержания какого-либо одного или нескольких иммуноглобулинов, а также изменения разнонаправленного характера наблюдаются при острых и хронических гепатитах, циррозах печени, диффузных заболеваниях соединительной ткани, инфаркте миокарда и др. Снижение показателей иммунной защиты называется иммунодефицитом. Врожденная генетически обусловленная иммунологическая недостаточность (первичные иммунодефициты) заключается в полном отсутствии или резком снижении функции какого-либо из звеньев иммунитета. Так, болезнь Брутона проявляется резким дефицитом В-клеток и агаммаглобулинемией, синдром Ди-Джорджи (гипоплазия тимуса) - дефицитом Т-клеток, а синдром Луи-Бар (атаксия - телеангиэктазия) - дефицитом обоих звеньев иммунитета. Первичный иммунодефицит выявляется обычно в детстве и проявляется в виде различных инфекционных осложнений. Прогноз, как правило, неблагоприятный.

Вторичные иммунодефициты возникают под влиянием целого ряда факторов. К ним относятся хронические инфекции или инвазии (малярия, токсоплазмоз, лейшманиоз, туберкулез, сифилис, лепра, менингококковая и пневмококковая инфекции, вирусный гепатит В и т.д.). Отдельно рассматривается такой вторичный иммунодефицит, как ВИЧ-инфекция (СПИД).

Нарушения иммунной системы могут быть вызваны пищевой недостаточностью белка или усиленной его потерей при заболеваниях кишечника и почек, усилением катаболизма белка при раке и миотонических дистрофиях. Иммунодефицитные состояния возникают также при радиационных поражениях, гиповитаминозах, терапии цитостатиками, антибиотиками, кортикостероидами, иммунодепрессантами и т.д.

Для вторичных иммунодефицитов характерны нарушения во всех звеньях защиты организма с равномерным или асимметричным снижением количественных параметров иммунитета или показателей функциональной активности. Для диагностики иммунологические исследования в этих случаях решающего значения обычно не имеют и служат для оценки тяжести заболевания, прогноза или для коррекции лечения иммунотропными препаратами.

Особо следует отметить, что проведение исследования иммунного статуса, хотя бы по ориентировочному перечню, необходимо при назначении иммуномодулирующей терапии, так как в настоящее время уже известно, что необоснованное применение иммуномодуляторов может привести к обратному эффекту. Показанием для данного вида лечения (чаще всего используются тималин или тактивин) является снижение абсолютного и относительного содержания Т-клеток, особенно числа «активных» Т-лимфоцитов, или снижение их функциональной активности (РТМЛ). Показанием для проведения иммунокоррекции может явиться также значительный дисбаланс (разнонаправленные изменения) между различными параметрами иммунитета, что часто наблюдается при аллергических и аутоиммунных заболеваниях.