Нейтрализация биологической активности.

Биологические реакции, которые можно ингибировать с помощью специфических антител.

Так, агглютинация эритроцитов, вызванная взаимодействием вируса гриппа с их поверхностными рецепторами, может быть заблокирована противовирусными антителами. На этом основано серологическое обнаружение этих антител.

Подавление размножения бактериофагов, конъюгированных с гаптеном, представляет собой высокочувствительный метод выявления антител к гаптену.

Тест на антитела к антигену жгутиков сальмонеллы основан на способности этих антител ингибировать подвижность бактерий .

Сходным образом выявляют и антитела к микоплазмам: они подавляют метаболизм этих микроорганизмов в культуре. Описаны случаи успешного применения Fаb-фрагментов специфических антител при передозировке лекарств.

Если будут получены гибридомы к широкому спектру лекарственных веществ, то такой подход может найти клиническое применение. Антитела к гормонам, в частности инсулину и тиреотропину, можно использовать для определения специфичности биологических реакций. Так, например, спе­цифичность инсулиноподобной активности сыворотки по отношению к жировому комку эпидидимиса крысы можно проверить по нейтрализующему эффекту антисыворотки. Такие антитела могут быть эффективны, в частности, проводятся опыты по иммунизации против хорионического гонадотропина. Эти исследования ведутся во всем мире, чтобы найти пути для предотвращения катастрофического перенаселения: хорионический гонадотропин необходим для поддержания имплантированного состояния яйцеклетки, и поэтому его нейтрализация будет приводить к прерыванию беременности.

Итак, в результате реакции антиген - антитело в геле образуются линии преципитации, по которым можно судить о числе реагирующих компонентов, иммунологическом родстве антигенов (двойная диффузия по Ухтерлони) и их электрофоретической подвижности (иммуноэлектрофорез). Концентрацию антигена определяют с помощью простой радиальной иммунодиффузии, ракетного и двумерного электрофореза. Чувствительным количественным методом определения антигенов служит и лазерная нефелометрия.

Антитела могут быть обнаружены в макроскопической реакции агглютинации с помощью частиц, нагруженных антигеном. Иммуносорбен-ты, полученные присоединением антител к сефарозе, можно использовать для аффинной очистки антигенов, входящих в состав сложных смесей, а в обратной постановке - для очистки антител.

Разработаны многочисленные варианты иммунологического анализа, основанные на взаимодействии меченых антигенов и антител. В качестве меток используют радиоактивные изотопы и ферменты. В системах, где реакция происходит в жидкой фазе, количество антител можно оценить, добавляя избыток меченого антигена с последующей преципитацией комплекса антиген-антитело.

При радиоиммунологическом определении антигена тестируемый материал конкурирует с меченым антигеном за ограниченное число антител-по количеству вытесненной метки и судят о концентрации антигена в исследуемом материале.

Иммунорадиометрические тесты заключаются в связывании антигена с адсорбированными на твердой фазе антителами или антител с адсорбированным на твердой фазе антигеном с последующим выявлением лиганда мечеными антииммуноглобулинами. Антигены в сложной смеси могут быть идентифицированы методом иммуноблоттинга.

Локализация антигенов в тканях, в клетках или на поверхности клеток может быть установлена под микроскопом с помощью антител, конъюги­рованных с флуорохромами или ферментами, в частности пероксидазой (в последнем случае продукт реакции окрашен и легко выявляется). В прямом тесте меченые антитела непосредственно наносят на ткань. В непрямом - метку конъюгируют с антииммуноглобулинами, которые используют как вторые антитела, усиливающие сигнал. Флуоресцирующие антитела, связанные с поверхностью одиночных клеток, например лимфоцитов, могут быть определены количественно методом проточной цитофлуориметрии. Для исследования ультраструктуры клеток антитела обычно конъюгируют с пероксидазой.

Клетки, поверхность которых помечена специфическими антителами, могут быть фракционированы с помощью проточного цитофлуориметра, пэннинга или розетирования. Клетки, несущие поверхностные антитела, можно избирательно устранить с помощью комплемента или конъюгирован-ными с токсином антителами к иммуноглобулинам.

Антигены, имеющие биологическую активность, например бактериальные токсины или гормоны, такие, как хорионический гонадотропин, могут быть нейтрализованы антителами.

Рекомендуемая литература.

1. Галактионов В. Г. Роль макрофагов в эволюции специфического иммунитета.— Иммунология, 1983, № 1, с. 17—26.

2. Галактионов В. Г., Анфалова Т. В. Сингенные и аллогенные отношения при макрофагальной индукции иммунного ответа у мышей разных генотипов.— Журн. общ. биол., 1974, № 3, с. 365—375.

3. Галактионов В. Г., Горбачева Л. Д. Преодоление несингенных отношений между взаимодействующими клетками лимфомиелоидного комплекса с помощью «аллогенной» РНК. — Журн. общ. биол., 1980, № 4, с. 532—545.