Материалы и оборудование.

Монолит почвы с растением, пинцет, часовое стекло, ножницы, весы, разновесы, колбы объемом 250 мл, содержащие по 99 мл стерильной дистиллированной воды, крючки из проволоки, микропипетки, шпатели, лупа, микроскоп, чашки Петри, МПА или КАА, прибор для счета микробных колоний, стерильный кварцевый песок, колбы со стерильной дистиллированной водой, пробирки, пипетки на 10 и 1,2 мл, микропипетки на 0,1—0,2 мл.

Ход работы

Растение выкапывают с монолитом почвы. Стерильным пинцетом корни растения осторожно освобождают от прилипшей к ним почвы. С корневой системы растения стерильными ножницами срезают кусочки молодых корней и отвешивают 1 г на часовом стекле. Пинцетом переносят навеску корней в первую колбу с 99 мл стерильной дистиллированной воды и взбалтывают содержимое колбы 2 мин. Стерильным металлическим крючком переносят корни во вторую колбу с 99 мл стерильной дистиллированной воды и вновь взбалтывают содержимое колбы 2 мин.. Затем корни переносят последовательно в колбы № 3, 4, 5, 6 и 7, отмывая их в каждой колбе по 2 мин. В воду колб № 6 и 7 предварительно перед стерилизацией вносят по 3—5 г хорошо промытого стерильного кварцевого песка. Песком отделяются микроорганизмы, находящиеся в тесном контакте с корнем.

Для качественно-количественного анализа ризосферной и корневой микрофлоры из каждой колбы стерильной микропипеткой высевают по 0,05 мл отмывной воды на поверхность пластинки МПА или КАА в чашки Петри. Повторность высева 3—5-кратная. Соблюдая стерильность, каплю высеянной жидкости втирают шпателем в поверхность питательной среды. Для каждого разведения следует иметь отдельную пипетку и отдельный шпатель.

Засеянные чашки Петри помещают в термостат при температуре 28—30°С. Через 3—5 дней приступают к анализу колоний, развившихся на агаровых пластинках в чашках Петри.

Колонии микроорганизмов изучают при малом увеличении микроскопа (окуляр 10—15х, объектив 8—10х) и делают подробное описание. Из колоний приготовляют мазки и рассматривают их, пользуясь объективом МИ-90. На препаратах обращают внимание на морфологические особенности микроорганизмов и по возможности устанавливают родовой состав ризосферной и корневой микрофлоры.

Анализ результатов опыта показывает, что количество микроорганизмов по мере увеличения степени отмыва корней почти не убывает. Наоборот, в двух последних колбах (№ 6, 7) численность микроорганизмов возрастает по сравнению с их численностью в отмывах первых колб. В чашках Петри с посевом из отмывов первых колб встречаются крупные колонии бацилл. По мере увеличения степени отмыва число спороносных бактерий уменьшается, зато возрастает число мелких, точечных колоний бактерий рода Рsеиdотопаs и колоний микобактерий, окрашенных в желтый и оранжевый цвет.

В высеве жидкости из отмывов первых и последних колб на пластинках питательной среды часто вырастает слишком много колоний микроорганизмов, которые трудно поддаются счету. Поэтому для более точного количественного определения микроорганизмов ризосферной зоны суспензию отмыва в первой колбе дополнительно взбалтывают 5 мин и из нее готовят ряд разведений. Из разведений делают посевы на пластинки МПА или КАА в чашки Петри, как указано выше.

Для количественного учета микроорганизмов корневой зоны используют отмывы остальных шести колб. Содержимое этих колб сливают вместе, из полученной суспензии готовят ряд разведений и делают посевы из них на пластинки питательной среды в чашки Петри. Засеянные чашки Петри выдерживают в термостате 3—5 суток при температуре 28—30°С. По всем параллельным чашкам Петри для каждого разведения подсчитывают число развившихся колоний и вычисляют среднее количество колоний на чашку (см. выше).

Число колоний, полученное на чашку Петри, умножают на 20 (пересчет с 0,05 мл на 1 мл), на степень разведения, на 600 (6 смывов по 100 мл) и получают количество микроорганизмов на 1 г корней.