Работа 8. Количественный учет микроорганизмов почвы методом предельных разведений на жидких питательных средах
Метод предельных разведений обычно используют при групповом анализе почвенных микроорганизмов для количественного определения аммонификаторов, нитрификаторов, денитрификаторов, клетчаткоразрушающих бактерий и др. Данный метод требует особо тщательного соблюдения правил стерильности как при приготовлении разведений почвенной суспензии, так и при посеве суспензии на питательные среды, так как каждая случайно занесенная клетка может привести сразу к значительной ошибке в численности микроорганизмов.
Материалы и оборудование
Весы, разновесы, часовое стекло, скальпель, ступка, резиновая перчатка, колба со стерильной дистиллированной водой, пипетки на 10 мл и 1 мл, пробирки, две колбы объемом 250 мл, питательная среда.
Ход работы
Для количественного учета микроорганизмов методом предельных разведений на жидких питательных средах навеску исследуемой почвы подвергают растиранию в ступке, а затем готовят ряд последовательных разведений почвенной суспензии точно так же, как при посеве на твердые питательные среды (см. работу 23).
Приготовленную почвенную суспензию высевают в пробирки или колбы с питательной средой, соответствующей данной физиологической группе микроорганизмов. Так, для количественного учета аммонификаторов обычно пользуются пептонной водой, учета нитрификаторов—средой Виноградского, учета денитрификаторов—средой Гильтэя, учета клетчаткоразрушающих аэробов—средой Гетчинсона, учета клетчаткоразрушающих анаэробов—средой Имшенецкого, для учета маслянокислых бактерий—средой Виноградского. Состав и приготовление питательных сред приведены в работах при изучении микроорганизмов отдельных физиологических групп.
Для учета микроорганизмов, характеризующихся высокой численностью (аммонификаторы, денитрификаторы, маслянокислые бактерии), почвенную суспензию рекомендуется высевать из разведений 1/1000 и выше; для учета микроорганизмов, сравнительно мало распространенных (нитрификаторы, клетчаткоразрушающие бактерии), посев почвенной суспензии проводят из первых 2—4 разведений—1/10, 1/100, 1/1000, 1/10000. В каждую пробирку или колбу с питательной средой стерильной пипеткой высевают по 1 мл почвенной суспензии из соответствующего разведения. Суспензией каждого разведения засевают 3—5 пробирок или колб.
Засеянные пробирки или колбы помещают в термостат для инкубации при температуре, оптимальной для данной физиологической группы микроорганизмов.
Количество микроорганизмов, развившихся на питательных средах, определяют по таблице Мак-Креди, составленной на основании методов вариационной статистики.
Для определения числа микроорганизмов в засеянных пробирках или колбах составляют так называемую числовую характеристику. Она состоит из трех цифр. Первая цифра соответствует числу пробирок последнего разведения, в котором еще обнаруживается рост микроорганизмов в пробирках всех повторностей. Следующие две цифры обозначают число пробирок с ростом микроорганизмов в двух последующих разведениях. Если рост микроорганизмов обнаружен более чем в двух последующих разведениях, число этих пробирок прибавляют к последней цифре.
По трехзначной числовой характеристике в таблице Мак-Креди находят вероятное число микроорганизмов в 1 мл разведения, принятого за первую цифру числовой характеристики. Умножив это вероятное число микроорганизмов на соответствующее разведение, получают количество клеток микроорганизмов в 1 г. исследуемой почвы. Для большей точности получаемых результатов содержание клеток микроорганизмов пересчитывают на 1 г. абсолютно сухой почвы, учитывая процент влажности почвы.
Пример 1
| Разведение | 1/10 | 1/100 | 1/1000 | 1/10000 | 1/100000 |
| Число засеянных пробирок | |||||
| Число пробирок, в которых обнаружен рост бактерий | |||||
| Числовая характеристика — 321. |
Вероятное число микроорганизмов по таблице Мак-Креди — 15,0.
Число микроорганизмов в 1 г. воздушно-сухой почвы: 15´100 = 1500.
Пример 2
| Разведение | 1/10 | 1/100 | 1/1000 | 1/10000 | 1/100000 | 1/1000000 |
| Число засеянных пробирок | ||||||
| Число пробирок, в которых обнаружен рост бактерий | ||||||
| Числовая характеристика — 502 |
Вероятное число микроорганизмов по таблице Мак-Креди — 4,0.
Число микроорганизмов в 1 г. воздушно-сухой почвы: 4 ´ 1000 =4000.
Приводим таблицу Мак-Креди для быстрой обработки результатов учета микробов по методу предельных разведений
| Числовая характеристика | Наиболее вероятное число микробов при заражении сред в параллельных пробирках | Числовая характеристика | Наиболее вероятное число микробов при заражении сред в параллельных пробирках | ||||||||||||||
| б | |||||||||||||||||
| 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,0 | -- | -- | 1,7 | -- | ||||||||||
| 0,5 | 0,3 | 0,2 | 0,2 | 2,5 | 0,9 | 0,6 | 0.5 | ||||||||||
| -- | -- | 0,5 | 0,4 | 5,0 | 1,4 | 0,9 | 0,7 | ||||||||||
| -- | -- | 0,7 | -- | -- | 2,0 | 1,2 | 0,9 | ||||||||||
| 0,5 | 0,3 | 0,2 | 0,2 | -- | -- | 1,6 | 1,2 | ||||||||||
| 0,9 | 0,6 | 0,5 | 0,4 | 6,0 | 1,5 | 0,9 | 0,7 | ||||||||||
| -- | -- | 0,7 | 0,6 | 13,0 | 2,0 | 1,3 | 0,9 | ||||||||||
| -- | -- | 0,9 | -- | 20,0 | 3,0 | 1,6 | 1,2 | ||||||||||
| 0,9 | 0,6 | 0,5 | 0,4 | -- | -- | 2,0 | -- | ||||||||||
| -- | -- | 0,7 | 0,6 | 25,0 | 2,0 | 1,3 | 0,9 | ||||||||||
| -- | -- | 0,9 | -- | 70,0 | 3,0 | 1,6 | 1,2 | ||||||||||
| -- | -- | 0,7 | 0,6 | 110,0 | 3,5 | 2,0 | 1,4 | ||||||||||
| -- | -- | 0,9 | -- | -- | 4,0 | -- | -- | ||||||||||
| -- | -- | 0,9 | -- | -- | 3.0 | 1,7 | 1,2 | ||||||||||
| -- | -- | 1,2 | -- | -- | 3,5 | 2,0 | 1,4 | ||||||||||
| 0,6 | 0,4 | 0,3 | 0,2 | -- | 0,4- | -- | -- | ||||||||||
| 1,2 | 0,7 | 0,5 | 0,4 | -- | -- | 2,0 | 1,4 | ||||||||||
| -- | 1,1 | 0,8 | 0,6 | -- | -- | 3,0 | -- | ||||||||||
| -- | -- | 1,0 | 0,8 | -- | 2,5 | 1,1 | 0,8 | ||||||||||
| 1,3 | 0,7 | 0,5 | 0,4 | -- | 4,0 | 1.6 | 1,1 | ||||||||||
| 2,0 | 1,1 | 0,8 | 0,6 | -- | 6,5 | 2,0 | 1,4 | ||||||||||
| -- | -- | 1,1 | 0,8 | -- | -- | 2,5 | -- | ||||||||||
| -- | -- | 1,3 | -- | -- | 4,5 | 1,6 | 1,1 | ||||||||||
| 2,0 | 1,1 | 0,8 | 0,6 | -- | 7,5 | 2,0 | 1,4 | ||||||||||
| 3,0 | 1,5 | 1,1 | 0,8 | -- | 11,5 | 3,0 | 1,7 | ||||||||||
| -- | -- | 1,3 | 1,0 | -- | 16,0 | 3,5 | 2,0 | ||||||||||
| -- | --, | 1.6 | -- | -- | 9,5 | 2,0 | 1,4 | ||||||||||
| -- | 1,6 | 1,1 | 0,8 | -- | 15,0 | 3,0 | 1,7 | ||||||||||
| -- | -- | 1,4 | 1,0 | -- | 20,0 | 3,5 | 2,0 | ||||||||||
| -- | -- | 1,6 | -- | .-- | 30,0 | -- | -- | ||||||||||
| -- | -- | 1,4 | 1,1 | -- | 25,0 | 3,0 | 1,7 | ||||||||||
| -- | 45,0 | 3.5 | 2,0 | -- | -- | -- | 2,5 | ||||||||||
| -- | 110,0 | 4,0 | -- | -- | -- | -- | 3,0 | ||||||||||
| -- | 140,0 | 5,0 | -- | -- | -- | -- | 4,0 | ||||||||||
| -- | -- | 3,5 | 2,0 | -- | -- | -- | 6,0 | ||||||||||
| -- | -- | 4,5 | 2,5 | -- | -- | -- | 7,5 | ||||||||||
| -- | -- | -- | 2,5 | -- | -- | -- | 3,5 | ||||||||||
| -- | -- | 2,5 | 1,3 | -- | -- | -- | 4,5 | ||||||||||
| -- | -- | 3,5 | 1,7 | -- | -- | --. | 6,0 | ||||||||||
| -- | -- | 5,0 | 2,0 | -- | -- | -- | 8,5 | ||||||||||
| -- | -- | 7,0 | 2,5 | -- | -- | -- | 5,0 | ||||||||||
| -- | -- | 3,5 | 1,7 | -- | -- | -- | 7,0 | ||||||||||
| -- | -- | 5,5 | 2,0 | -- | -- | -- | 9,5 | ||||||||||
| -- | -- | 8,0 | 2,5 | -- | -- | -- | 12,0 | ||||||||||
| -- | -- | 11,0 | -- | -- | -- | -- | 15,0 | ||||||||||
| -- | -- | 14,0 | -- | -- | -- | -- | 17,5 | ||||||||||
| -- | -- | 6.0 | 2,0 | -- | -- | -- | 8,0 | ||||||||||
| — | — | 9,5 | 2,5 | — | — | — | 11,0 | ||||||||||
| -- | -- | 13,0 | 3,0 | -- | -- | -- | 14,0 | ||||||||||
| — | — | 17,0 | — | --- | — | — | 17,5 | ||||||||||
| — | — | 20,0 | — | — | — | — | 20,0 | ||||||||||
| — | — | 11,5 | 2,5 | — | — | — | 25,0 | ||||||||||
| — | — | 16,5 | 3,0 | — | — | — | 13,0 | ||||||||||
| — | — | 20,0 | 4.0 | — | — | — | 17,0 | ||||||||||
| — | — | 30,0 | — | — | — | --- | 25,0 | ||||||||||
| — | — | 35,0 | — | — | — | --- | 30,0 | ||||||||||
| — | — | 25,0 | 3,5 | — | — | --- | 35,0 | ||||||||||
| — | — | 40,0 | 4,0 | — | — | — | 45,0 | ||||||||||
| — | — | 70,0 | — | — | — | --- | 25,0 | ||||||||||
| — | — | 140,0 | — | 551- | — | — | --- | 35,0 | |||||||||
| — | — | 160,0 | — | — | — | --- | 60,0 | ||||||||||
| — | — | — | 4,0 | — | — | — | 90,0 | ||||||||||
| --- | — | — | 5,0 | — | — | --- | 100,0 | ||||||||||
| --- | --- | --- | 180,0 | ||||||||||||||
Дата добавления: 2021-03-18; просмотров: 359;
Поиск по сайту
Узнать еще
- I. Создание системы управленческого учета.
- II. Индивидуальная работа по карточкам.
- II. СВЕДЕНИЯ О ВОИНСКОМ УЧЕТЕ
- V.III. Работа горного компаса
- А) Расчет электрической цепи методом свертывания
- А. Все условные рефлексы подразделяют на те же группы, что и безусловные, на базе которых они были выработаны.
- Автоматизация документооборота и учета грузов на складах
- Автоматизированная форма учета
Публикации по технике и механике
Публикации по биологии
Публикации по информатике
Публикации по строительству
Публикации по физике
Публикации по химии
Публикации по электронике
Публикации по искусству
Публикации по истории
Публикации по медицине
