Работа 9. Качественно – количественный учет микрофлоры почвы методом Д. М. Новогрудского

Микроорганизмы своей жизнедеятельностью в значительной мере влияют на почвообразовательные процессы, создавая условия для развития тех или иных биогеоценозов. Изучение микроорганизмов почвы является составной частью геоботанических исследований.

Для определения общего количества микроорганизмов в почве рекомендуется метод высева почвенного мелкозема на агаризованную воду по Д. М. Новогрудскому. Метод успешно используют для получения сравнительных данных о заселенности микроорганизмами различных почв с учетом почвенного горизонта, времени года, растения-эдификатора, ризосферной зоны, а также для выяснения соотношения отдельных групп микроорганизмов: бактерий, плесневых грибов и актиномицетов в почве.

Метод основан на высеве строго определенной навески почвенного мелкозема на агаризованную воду. Учетным элементом является почвенная частичка. Она естественный источник выделения микроорганизмов и одновременно природный субстрат. Ввиду крайней бедности среды рост микроорганизмов идет лишь в водной пленке вокруг почвенной частички, исключая плесневые грибы, способные образовывать свои водные пленки и разрастаться на поверхности агара.

Материалы и оборудование

Чашки Петри, пробирки с голодным агаром, сито с диаметром отверстий 0,25 мм, ступка, спиртовка, скальпель, весы аналитические, предметные стекла, лезвия бритвы, пробирка, микроскоп, исследуемая почва, резиновая перчатка.

Ходработы

Разогретую агаризованную воду, соблюдая стерильность, разливают в чашки Петри и дают пластинке застыть.

Небольшое количество воздушно-сухой исследуемой почвы тщательно растирают в ступке пальцем в резиновой перчатке и насыпают в сито с диаметром отверстий 0,25 мм. Сито с почвой взвешивают на аналитических весах и высевают почвенный мелкозем равномерно по всей поверхности агаровой пластинки. Следует учесть, что меньшая навеска почвы дает более высокие показатели. Наиболее благоприятна навеска до 20 мг. Сито с оставшейся почвой вновь взвешивают и определяют точную навеску высеянной почвы. Одной пробой почвы засевают три чашки Петри, две из них используют для подсчета бактерий и грибов, третью—для подсчета актиномицетов. Засеянные чашки Петри помещают в термостат на проращивание при температуре 25—28 °С.

Количество грибов и бактерий подсчитывают через 2—3 суток после посева, актиномицетов—через 5—7 суток.

Для учета количества микроорганизмов на агаровой пластинке пробиркой с ровным краем вырезают пять дисков: один—в центре пластинки и четыре—по двум взаимно перпендикулярным диаметрам. Диск переносят на предметное стекло и лезвием бритвы разрезают на полоски так, чтобы ширина полоски умещалась в поле зрения микроскопа при малом увеличении (объектив 8´, 10´, 20´, окуляр 10´, 15´).

Каждую полоску систематически просматривают под микроскопом и исследуют каждую почвенную частичку, отмечая, какие микроорганизмы развились в ее сфере. Одна почвенная частичка может дать начало одновременно колонии бактерий, актиномицетов и грибов. Группу слившихся почвенных частичек следует считать за один образовательный центр. Подсчитав количество микроорганизмов в пяти дисках, определяют содержание микроорганизмов в 1 г. исследуемой почвы по формуле:

Х = A x C / 5B x D

где х—количество микроорганизмов в 1 г. почвы, А—количество колоний в пяти дисках, В—площадь диска, см² (диаметр диска определяют полоской миллиметровой бумаги), с— площадь чашки Петри,1 см² D—навеска почвы, г.

Для большей точности результатов следует внести поправку на влажность исследуемой почвы.