Определение наличия бактерий рода сальмонелл

Метод основан на способности бактерий рода Сальмонелл, расти на дифференциально-диагностических средах, и давать реакцию агглютинации со специфическими сальмонеллезными сыворотками.

Навеску продукта в количестве 25 г засевают в 100 мл среды обогащения (магниевую или селенитовый бульон). Посевы помещают на 18-20 ч в термостат при температуре 37⁰С.

На второй день исследования из сред обогащения делают высев в чашки Петри на плотные дифференциально-диагностические среды: Висмут-сульфитный агар (ВСА), среду Плоскирева, Левина или Эндо. Перед посевом среду необходимо подсушить в термостате, чтобы рост не сливался и выросли изолированные колонии. Посевы на средах Эндо и Плоскирева термостатируют в течение 15-18 ч, на среде ВСА - 48 ч при 37⁰С.

На ВСА сальмонеллы образуют черные с металлическим блеском колонии, цвет питательной среды под колониями черный. Исключение составляют S.paratyphi, S.cholerae suis и ряд других, растущих в виде мелких серовато-зеленых колоний с черным центром и без него. Кишечная палочка на ВСА образует бесцветные, зеленоватые или серые колонии или не дает роста.

На среде Эндо колонии сальмонелл бесцветные, слабо-розовые, выпуклые. На средах Плоскирева и Левина колонии прозрачные, голубоватые, бледные или нежно-розовые.

С дифференциально-диагностических сред отсевают несколько колоний на трехсахарный агар с мочевиной или среду Клиглера с мочевиной: посевы делают сначала штрихом по скошенной поверхности, а затем уколом в столбик. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37⁰С 24 ч. На этих средах учитывают способность культуры ферментировать глюкозу, лактозу и мочевину. Для сальмонелл характерно разложение глюкозы с образованием газа, лактозу и мочевину они не разлагают. Готовая среда – трехсахарный агар с мочевиной имеет розовый цвет. Отсутствие изменения цвета скошенной поверхности указывает на то, что лактоза и сахароза не разлагаются исследуемой культурой. Желтое окрашивание столбика, образование газа (разрывы в глубине агара) и сероводорода (почернение) указывает на рост бактерий из рода сальмонелл.

Желательно со среды Клиглера или с трехсахарного агара, отсеять выросшую культуру на скошенный агар, короткий пестрый ряд, включающий среды Гисса с лактозой, глюкозой, маннитом, сахарозой, мальтозой. Для определения индола и сероводорода посев делают на рыбо- или мясо-пептонный бульон, после чего над посевом между пробкой и стенкой пробирки закрепляют узкую полоску фильтровальной бумаги, смоченную уксусно-кислым свинцом для определения сероводорода и раствором щавелевой кислоты для определения индола. Посевы термостатируют при температуре 37⁰С в течение 24 ч.

Таким образом, к сальмонеллам относятся бактерии, не разлагающие лактозу, сахарозу и мочевину, ферментирующие глюкозу, маннит и мальтозу с образованием газа, продуцирующие сероводород и не образующие индол.

Для окончательного заключения с выделенной культурой ставят РА на предметном стекле с поливалентной, О- и Н-агглютинирующими монорецепторными сальмонеллезными сыворотками. В случае положительной реакции агглютинации с монорецепторными О- и Н-агглютинирующими сыворотками делают окончательный вывод о присутствии в исследуемом продукте сальмонелл.