Методические указания

1. Способы стерилизации и дезинфекции лабораторной посуды

и лечебного инструментария

Теоретически разобрать принципы и физико-химические основы деконтаминации, учитывая особенности разрушения бактерий, грибов и их спор, виру­сов, вироидов и прионов. Познакомиться с современными методами дезинфек­ции и контролем над ее эффективностью.

Разобрать последовательность и особенность предстерилизационной обра­ботки в зависимости от объекта стерилизации. Познакомиться и осуществить предстерилизационную обработку и упаковку оборудования для обработки су­хим жаром и паром под давлением. Изучить основные методы стерилизации, оборудование, которое используется для ее осуществления.

2. Определить по готовым посевам антибактериальное действие УФ-лучей в отношении стафилококка и кишечной палочки,

зарисовать демонстрацию

Ход исследования: 1 мл суспензии стафилококка или кишечной па­лочки в изотоническом растворе хлорида натрия поместить на стерильное часо­вое стекло и облучить лампой 15 мин на расстоянии 10 - 20 см засеять на МПБ и инкубировать 16-24 ч параллельно с контролем из необлученной культуры. Помутнение, свидетельствующее о росте должно наблюдаться только в кон­трольной пробирке. Просмотреть результаты исследования и зарегистрировать в таблице.

Таблица1. Бактерицидное действие УФ-лучей на взвесь бактерий

Заключение ________________________________________________

3.Бактериологическое изучение антибактериального действия спирта, перманганата калия, хлорамина на культуры стафилококка и кишечной

палочки, зарегистрировать результаты

Ход исследования:диски фильтровальной бумаги смачивают раствором исследуемого дезинфицирующего вещества и помещают на поверхность МПА в чашки Петри, засеянные «газоном» культурами стафилококка и кишечной па­лочки. Чашки инкубируют при 37 °С в течение 24 ч. Зарегистрировать результа­ты проведенного опыта в таблице.

Таблица 2. Результаты исследования бактерицидных свойств ряда химических дезинфектантов

4. Определение антимикробного действия антисептических

и дезинфецирующих веществ

Используют два вида тест-объектов: 1) шелковые нити, смоченные Е. coli; 2) шелковые нити, обработанные В. subtilis или другой спорообразующей куль­турой. Нити помещают в растворы фенола (5 %), лизола (5 %), хлорной извести (10 %) на 5 и 60 мин, после, чего отмывают от исследуемых веществ, помещают в МПБ и инкубируют при 37 °С 24 ч. Контрольные тесты не подвергают дей­ствию химических веществ.

Зарегистрируйте результаты исследования антибактериального действия антисептических и дезинфицирующих веществ в табл. 3 (интенсивность роста на МПБ можно описать, используя следующие определения - рост отсутствует, скудный рост, рост культуры средней интенсивности, обильный рост) и сделай­те заключение.

Таблица 3. Результаты исследования бактерицидного действия антисептических и дезинфицирующих средств

Заключение ________________________________________________

5. Изучение антибактериального действия высоких температур

Для проведения исследования используют три пробирки МПБ в каждой из которых помещена шелковая нить, пропитанная Е. coli и 3 пробирки с шелковой нитью, обработанные В. Subtilis (в данном методе в качестве тест-культур можно выбрать любые другие культуры не спорообразующих и спорообразующих бактерий). Первые две пробирки подвергают автоклавированию, вторые кипяче­нию, третьи (контроль) никакому воздействию не подвергают. После обработки посевы помещают в термостат и выдерживают при 37 °С 24 ч. Отметьте резуль­таты поставленного опыта в табл. 4 и сделайте заключение.

Таблица 4. Результаты исследования бактерицидного действия высоких температур

Заключение_______________________________________________________

6. Проведение микробиологического контроля эффективности

дезинфекции методом смывов

О качестве дезинфекции после ее проведения судят по отсутствию на изделиях медицинского назначения золотистого стафилококка, синегнойной палочки и бактерий группы кишечной палочки. Контролю подлежит 1 % от одновременно обработанных изделий одного наименования, но не менее 3-5 единиц.

Контроль качества дезинфекции осуществляют методом смывов. Взятие смывов производят с поверхностей изделий медицинского назначения до проведения дезинфекции и после нее. Взятие смывов производят стерильными марлевыми салфетками размером 5×5 см, простерилизованными в бумажных пакетах или чашках Петри.

Перед взятием смывов с объектов, в стерильные широкогорлые пробирки со стеклянными бусами стерильной пипеткой разливают по 10 мл стерильной водопроводной воды или нейтрализатора, соответствующего применяемому дезинфицирующему средству:

· для группы окислителей (хлор, йод, перекись содержащие средства) - 0,5-1 % раствор тиосульфата натрия;

· для катионных ПАВ - 0,5 % раствор сульфонола;

· для альдегид- и фенолсодержащих средств - вода;

· для композиционных средств - универсальный нейтрализатор, содержа­щий твин-80 - 3%, сапонин - 3%, гистидин - 0,1%, цистеин - 0,1%.

Салфетку захватывают стерильным пинцетом, увлажняют стерильной водопроводной во­дой из пробирки и протирают поверхность обрабатываемого изделия. После этого салфетку помещают в пробирку с водой и затем встряхивают в течение 5 мин, избегая увлажнения пробки.

У изделий, имеющих функциональные каналы, рабочий конец изделия опускают в пробирку со стерильной водопроводной водой или нейтрализато­ром и с помощью стерильного шприца или пипетки 1-2 раза промывают канал этим раствором.

Смывы по 0,1 мл наносят на поверхность желточно-солевого, кровяного агара и на среду Эндо. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37 °С. Результаты учитывают через 48 часов.

При наличии роста микроорганизмов на агаре идентификацию выделенных микроорганизмов проводят в соответствии с действующими методическими документами. Дезинфекцию считают эффективной при отсутствии роста микроорганизмов, указанных выше.

Провести посев смывов с медицинского инструментария и мебели, обработанного перекисью водорода, хлорамином, спиртом.

7. Определить бактериологическим путем качество

проведения стерилизации

7.1. Проведение посева с целью проверки качества стерилизации шовно­го, перевязочного, стоматологического и хирургического инструмента

путем прямого посева и методом смывов

Контроль стерильности проводят путем прямого посева (погружения) изделий в питательные среды (мелкие изделия или детали разъемных изделий -целиком, от шовного или перевязочного материала - отрезанные фрагменты). Стерильность крупных объектов изучают путем методов смывов. Материалом засевают две среды - тиогликолевую (для роста бактерий) и среду Сабуро (для роста грибов). Посевы на тиогликолевую среду выдерживают при 32 °С, на среду Сабуро - при 22 °С в течение 7 суток (для изделий после тепловой стерилизации). При отсутствии роста во всех пробирках делают заключение о стерильности изделия. Произвести, соблюдая правила асептики посев перевязочного материала на тиогликолевую среду и среду Сабуро.

7.2. Знакомство с результатами биологического теста контроля

качества стерилизации, зарегистрировать результаты

Бактериологический метод контроля является объективным методом оценки эффективности работы паровых, воздушных стерилизаторов и основан на выявлении гибели спор тест-культур. Осуществляется с помощью биотестов, которые представляют собой дозированное количество спор тест-культуры, помещенное в упаковку (инсулиновые флаконы, чашечки из алюминиевой фольги, диски из фильтровальной бумаги). Для контроля паровых стерилизаторов используются высушенные споры тест-культуры Bacillus stearothermophilus ВКМ В-718; для контроля воздушных стерилизаторов - Bacillus licheniformis штамм G.

Биотесты готовят бактериологические лаборатории центров дезинфекции и стерилизации или центров гигиены и эпидемиологии. После проведения стерилизации тест-культуры засевают на МПБ и инкубируют 24-48 ч. Бульон остается прозрачным, если споры погибли, т.е. если стерилизация эффективна, бульон не должен мутнеть. Ознакомьтесь с демонстрацией посевов тест-культур на МПБ, сделайте заключение об эффективности, проведенной стерилизации.

Контрольные вопросы

Что такое дезинфекция?

Что такое стерилизация?

Чем отличается стерилизацияот дезинфекции?

Какие методы физической дезинфекции Вам известны, механизм их дей­ствия, бактерицидная эффективность?

Какие методы используют для стерилизации?

Какие предметы лучше подвергать стерилизации сухим жаром?

Что такое пастеризация и тиндализация, в каких случаях они применяются?

Какие методы контроля качества стерилизации Вам известны?

Какова методика бактериологического контроля эффективности стерилиза­ции?

Что такое стерилизация фильтрованием?

Назовите современные методы стерилизации и дезинфекции, перечислите антисептические препараты.

Как проводят дезинфекцию лабораторной посуды и изделий медицинского назначения?

Какие методы оценки качества дезинфекции изделий медицинского назначения Вам известны?

С какой целью и как осуществляют предстерилизационную очистку лабораторной посуды и изделий медицинского назначения?

Как оценить качество предстерилизационной обработки?