Лабораторная диагностика

Вирусологический метод – выделение вируса и его идентификация. Материал – фекалии больного (в 1 г фекалий содержится до 1 млн инфекционных доз), реже носоглоточный смыв, кровь, ликвор. Материал фильтруют, обрабатывают антибиотиком, вносят в культуру клеток Hep-2 и RD (из рабдомиосаркомы человека). Использование только двух клеточных линий для лабораторной диагностики полиомиелита позволяет стандартизировать полученные результаты. Через 5-7 дней возникает ЦПД в виде мелкозернистой деструкции клеток.

Идентификация вируса проводится в реакции нейтрализации, т. е. в культуры тканей вносят вирус в смеси с поливалентной противополиомиелитной сывороткой типов 1, 2, 3, а затем для определения типа – с отдельными типовыми сыворотками. При идентичности типа вируса и данной сыворотки ЦПД не возникает. Для установления внутритиповых различий между штаммами полиовирусов используют штаммоспецифические адсорбированные поликлональные и моноклональные иммунные сыворотки, молекулярную гибридизацию, полимеразную цепную реакцию и секвенирование вирусного генома.

Для программы ликвидации полиомиелита важное значение имеет дифференциация между штаммами дикого и вакцинного штамма.

Серологический диагноз используют для определения нарастания титра АТ в крови переболевших людей. С этой целью применяют реакцию нейтрализации в культуре ткани с парными сыворотками, полученными в острой стадии болезни и в период реконвалесценции. Ставят РСК, ИФА. При положительном результате выявляют четырехкратное нарастание титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой.

Специфическая профилактика осуществляется живыми и убитыми вакцинами, благодаря которым достигнут значительный прогресс в борьбе с полиомиелитом. ВОЗ принято решение о глобальной ликвидации полиомиелита после 2000 г.

Убитая вакцина получена американским ученым Солком в 1953 г. и содержит вирусы полиомиелита 1, 2, 3 типов, выращенные в почечной ткани обезьян. Она вызывает гуморальный иммунитет – образование IgG и IgM, но не препятствует репродукции вирусов в клетках слизистой оболочки кишечника.

Пероральная живая вакцина типов 1, 2, 3, получена в 1956 г. Сейбиным из аттенуированных штаммов вируса полиомиелита, культивированных в культуре клеток почек африканских зеленых мартышек. Помимо IgG и IgM-антител она индуцирует образование секреторных IgA-антител в слизистой оболочке пищеварительного тракта, особенно тонкого кишечника, и тем самым препятствует циркуляции диких штаммов вируса полиомиелита.

В настоящее время вакцина выпускается в жидком виде, применяется для вакцинации детей, начиная с 3-х месячного возраста, (вводят трехкратно, чтобы создать иммунитет против всех трех типов вируса) с интервалом в 4-6 недель и далее по схеме (в два года и 7 лет).

Для лечения используют сывороточный человеческий иммуноглобулин против полиомиелита, полученный из сыворотки доноров.

Вирусы Коксаки.

Выделены в 1947 г. Долдорфом и Сиклсом в местечке Коксаки от больного ребенка с симптомами полиомиелита. В настоящее время известно 30 серотипов Коксаки-вирусов, из них к группе Коксаки А относятся 1-24 серотипа (тип 23 отсутствует), к В – 1-6 серотипы.

Строение вирусов типично для всех пикорнавирусов, но есть следующие особенности: содержат гемагглютинин; патогенны для новорожденных мышей-сосунков. Причем, внутримышечное введение вируса Коксаки А вызывает вялые параличи и участки омертвения мышц, а Коксаки В – поражение внутренних органов и энцефаломиелит.

Клиника. Вирусы вызывают разнообразные по клинике заболевания:

а) герпангину – острую лихорадку с болями в животе, зеве и пузырьковыми высыпаниями на слизистой ротовой полости, иногда с ригидностью затылочных мышц;

б) эпидемическую миалгию – протекает с высокой температурой и колющими мышечными болями в области грудной клетки и живота;

в) эпидемическую плевродинию – сопровождается лихорадкой, плевритами, болевыми приступами в области груди (болезнь Борнхольма);

г) асептический серозный менингит – острая лихорадка с менингеальными симптомами;

д) энцефаломиокардит новорожденных – миокардит и паралитичекие формы, похожие на полиомиелит, кардиотропность больше выражена у вирусов Коксаки В.

В целом для вирусов Коксаки характерен полиорганный тропизм.

Диагностика осуществляется при выделении вируса из фекалий, смыва из носоглотки, ликвора путем заражения материалом мышей-сосунков и культур клеток. Для идентификации ставят реакцию нейтрализации в культуре клеток, на новорожденных мышах со специфическими сыворотками.

Серологический диагноз проводят путем выявления нарастания титра антител в парных сыворотках больного в РН, РТГА, ИФА.

Вирусы ЕСНО.

Вирусы ECHO описаны в 1941 г. Эндерсом. Название представляет собой аббревиатуру из первых букв английских слов enteric cytopathogenic human orphans. Так как их роль в патологии человека долго оставалась неизвестной, они были названы «сиротами». Отличаются от других энтеровирусов тем, что не патогенны для новорожденных мышей, имеют гемагглютинин. Известны 1-33 серотипы (кроме 10, 22, 23, 28), которые идентифицируются в реакции нейтрализации, ПЦР, ИФА.

Вирусы вызывают различные заболевания преимущественно в детском возрасте. Сродство к лимфоидной ткани – одна из характерных особенностей этих вирусов. После размножения вирусы проникают в лимфу, а затем в кровь, наступает вирусемия и генерализация инфекции. Дальнейшее развитие болезни зависит от свойств вируса, его тканевого тропизма и иммунного статуса организма. Многие серотипы способны поражать ЦНС, вызывая полиомиелитоподобные заболевания, асептический серозный менингит (серовары 2-9, 12, 14, 16, 21), желудочно-кишечные заболевания с синдромом диареи, респираторные заболевания (серовары 8-11, 20), увеит – воспаление слизистой оболочки глаза, заболевания паренхиматозных органов.

Диагностика проводится так же, как и при вирусах Коксаки.

Энтеровирус 70 вызывает субконъюнктивальные кровоизлияния и кератит. Иногда возникают осложнения со стороны ЦНС – боли в области корешков спинномозгового нерва, слабость мышц конечностей, парезы лицевого и языкоглоточного нервов. Основной путь передачи – контактный, реже фекально-оральный.

Энтеровирус 71 по свойствам занимает промежуточное положение между вирусами полиомиелита и нейротропными штаммами вируса Коксаки. Против энтеровируса 71 разработана эффективная инактивированная вакцина.

Специфическая профилактика. Получены положительные результаты при применении формалинизированных вакцин из наиболее патогенных энтеровирусов (Коксаки А-9, В-1, ЕСНО-6).

Вирус гепатита А

Морфология и свойства. Вирус гепатита А вызывает эпидемический гепатит. Он имеет сферическую форму, диаметр вириона 27 нм, геном представлен однонитевой (+)РНК с массой 2,6 МД (рис.24). Суперкапсид отсутствует. Тип симметрии кубический (икосаэдр). Капсид имеет 32 капсомера, он образован четырьмя полипептидами (VP1 – VP4). По своим свойствам вирус гепатита А выделен в отдельный род Hepatovirus. В антигенном отношении вирус гепатита А является однородным. Вирус размножается в организме шимпанзе, мармозет.

В настоящее время вирус удается культивировать в культуре клеток почек зеленых мартышек (культура 46 47).

Особенности вируса. Отмечается большая устойчивость к физико-химическим факторам. При 60˚С не утрачивает инфекционную активность в течение 12 часов, при 20˚С сохраняется годами, высокорезистентен к хлору, благодаря чему способен проникать в водопроводную воду через барьеры водоочистных сооружений, при 100˚С разрушается в течение 5 минут.

Чувствителен к формалину, УФ-лучам. Имеют более длительный цикл репродукции; отмечается строгий тропизм к паренхиматозным клеткам печени; репродукция в культуре клеток не сопровождается ЦПД.

Патогенез.Источник инфекции – больной человек. Путь передачи – фекально-оральный, чаще водный. Инкубационный период варьирует от 15 до 50 дней. Вирус с пищей, водой попадает в желудочно – кишечный тракт, где репродуцируется в эпителиальных клетках слизистой оболочки тонкой кишки и регионарных лимфатических узлах. Далее возбудитель проникает в кровь, где он обнаруживается в конце инкубационного периода и в первые дни заболевания.

Основная мишень действия вируса гепатита А – клетки печени, в цитоплазме которых происходит репродукция. Гепатоциты могут поражаться натуральными или естественными киллерами (ЕК), которые в активированном состоянии взаимодействуют с гепатоцитами, вызывая их разрушение. Активация ЕК происходит в результате их взаимодействия с интерфероном, индуцированным вирусом. Поражение гепатоцитов приводит к нарушению углеводного, белкового, пигментного обмена и сопровождается: желтухой, повышением ферментов (альдолазы, аспартатаминотрансферазы).

Далее возбудитель с желчью попадает в просвет кишечника и выделяется с фекалиями, в которых отмечается высокая концентрация вируса в конце инкубационного периода и в первые дни болезни (до желтухи).

Иммунитет после заболевания формируется пожизненный, обусловлен вируснейтрализирующими антителами секреторными IgA и клетками иммунной памяти. IgM исчезает из сыворотки через 3-4 месяца после начала заболевания, а IgG сохраняется годами. 80% населения к 40 годам имеют АТ. Чаще болеют дети в возрасте до 14 лет.