Лабораторная диагностика

Вирусные частицы в фекалиях выявляют методом иммуноэлектронной микроскопии, РИА, ИФА, ПЦР.

Чаще проводят серологический диагноз: определение Ig M в течение первых 3-6 недель в сыворотке больного путем постановки ИФА.

Специфическая профилактика. Применяют вакцину против гепатита А «Хаврикс», которая представляет собой стерильную суспензию, содержащую вирус гепатита А (штамм НМ 175), инактивированный формальдегидом и адсорбированный на гидроксиде алюминия. Вакцинный штамм вируса культивирован в диплоидных клетках человека MRS 5. Первичную вакцинацию проводят детям начиная с 12 месяцев, вводят одну дозу вакцины (0,5 мл), через 6-12 месяцев проводят ревакцинацию. Вакцина обеспечивает иммунитет не менее, чем на 20 лет.

Для лечения используют гаммаглобулин.

Риновирусы

В настоящее время выделено более 100 серологических вариантов, вызывающих ОРВИ и известных как «простудные вирусы». Их разделяют на две большие подгруппы по способности к репродукции в клетках приматов: вирусы группы Н размножаются и вызывают цитопатические изменения в ограниченной группе диплоидных клеток, человеческого эмбриона и клетках Hela; вирусы группы М размножаются и вызывают цитопатические изменения в клетках почек обезьян и клетках Hela.

Антигенная структура. По структуре единственного типоспецифического антигена выделяют 113 иммунологически разнородных групп (рис.25). У человека риновирусная инфекция вызывает выработку нейтрализующих АТ и состояние невосприимчивости на период, равный двум годам. Иммунитет эффективен только против гомологичного штамма.

Эпидемиология.Риновирусы распространены повсеместно, подъем заболеваемости отмечается в холодный период. Основной путь передачи – воздушно-капельный, резервуар – больной человек.

Клинические проявления. Инкубационный период – 2-5 суток, у человека заболевание протекает в виде ОРВИ, реже бронхопневмонии. У детей инфекции сопровождаются лихорадкой, у взрослых подъем температуры наблюдается редко. Продолжительность заболевания обычно составляет 7 суток.

Осложнения: хронический бронхит, синусит и воспаление среднего уха.

Лабораторная диагностика.Для выделения вируса используют культуры клеток, которые заражают слизью носовых ходов. Индикация по ЦПД, идентификация в РН, ПЦР.

20.1.4.4. Род Aphtovirus, вирус ящура

Афтовирусы представлены 7 серотипами вируса ящура, вызывающего тяжелые эпидемии крупного рогатого скота и свиней. Возбудитель впервые был выделен Леффлер и Фрош (1898). Человек заболевает после контакта, а также при употреблении в пищу сырого молока или плохо прожаренного мяса больных животных. В некоторых продуктах (масло, жиры) вирусы могут сохраняться до двух месяцев. Заболевание протекает сравнительно легко: инкубационный период составляет 2-18 суток. Далее на слизистой оболочке полости рта появляется везикулярная сыпь. Возможно поражение миокарда, паренхиматозных органов.

Возбудитель быстро распространяется при эпидемиях у скота.

Лабораторная диагностикавключает выделение возбудителя в культурах клеток и обнаружение специфических АТ в парных сыворотках в РН и РСК. Также возможна постановка биологической пробы заражением морских свинок в кожу стопы: через 24-48 часов в месте заражения и в полости рта появляются везикулы.

20.1.5. Семейство реовирусов (Reoviridae)

Семейство Reoviridae включает:

I род Orthoreovirus – реовирусы человека 1, 2, 3 типов (серовариантов), респираторные энтеропатогенные вирусы сиротки.

II род – Rotavirus (от слова «колесо») – вирусы человека и животных, вызывают гастроэнтериты, диареи у детей, подростков, солдат.

III род Coltivirus (2 серотипа).

IV род Orbivirus (100 серотипов).

Вирионы имеют сферическую форму, диаметром 60-80 нм, геном образован двунитевой РНК, состоящей из 10-12 сегментов (ротавирусы имеют 11 сегментов). Геномная РНК и РНК-полимераза образуют сердцевину вириона. Вирусы имеют кубический тип симметрии и состоят из 132 капсомеров.

В составе внутреннего и наружного капсидов обнаружено до 8 отдельных белков. Один их белков наружного капсида ответственен за связывание со специфическим клеточным рецептором, является гемагглютинином, придает типовую специфичность. С помощью другого белка вирус проникает в клетку хозяина.

20.1.5.1. Ротавирусы (Род Rotavirus)

Название рода связано со своеобразием морфологии (rota – колесо). Возбудитель был впервые обнаружен в 1973 г. Bischop в эпителиальных клетках слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки детей с острым гастроэнтеритом.

Морфология и свойства. Вирионы ротавирусов при электронно-микроскопическом исследовании имеют вид колес диаметром 70 нм с круговым ободком по периферии и отходящими от него внутрь спицами. Они окружены наружным и внутренним капсидом, внутри которого содержится двунитчатая фрагментированная РНК (состоит из 11 сегментов), в сердцевине, кроме геномной РНК, располагается вирионная РНК-полимераза. В составе вириона имеется 8 белков (VP1-VP8). Имеют кубический тип симметрии, нет липидов – устойчивы к эфиру и детергентам.

По антигенным свойствам ротавирусы разделены на 4 серотипа. Гликопротеин наружного капсида определяет гемагглютинирующие свойства и типовую антигенную специфичность (VP-3). VP-6 белок придает групповую специфичность, по групповым антигенам ротавирусы подразделяются на 6 серогрупп: A, B, C, D, E, F.

Культивирование. Вирусы не культивируется в курином эмбрионе и организме экспериментальных животных. При заражении некоторых культур ткани (клетки почек зеленых мартышек) вирусы в них репродуцируется не полностью, поскольку в цитоплазме собираются лишь вирусные белки без продукции вирионов.

Устойчивы к факторам окружающей среды: эфиру, хлороформу, ультразвуку, протеолитическим ферментам, при комнатной температуре сохраняются 7 месяцев.

Патогенез. Источник инфекции – больные люди с острой бессимптомной формой инфекции, а также вирусоносители.

Механизм заражения – фекально-оральный. Наиболее опасны больные в первые 3-5 дней заболевания, когда в фекалиях накапливается максимальное количество вирусов.

Вирус размножается в клетках эпителия ворсинок тонкого кишечника. Происходит разрушение клеток, что приводит к нарушению пищеварительной и всасывательной функции тонкого кишечника, снижению количества ферментов, уровня дисахаридов (мальтозы, сахарозы, лактозы) и нарушению процесса всасывания простых сахаров. Переходя в толстый кишечник, моно- и дисахариды создают повышенное осмотическое давление, что препятствует всасыванию воды из кишечного содержимого и приводит к поступлению в кишечник воды из тканей. Усиливается перистальтика, возникает выраженная диарея.

Клиника. Инкубационный период от 15 часов до 3-5 дней. Ротавирусы вызывают в 60% случаев острый гастроэнтерит у детей в возрасте от 1 года до 6 лет, а также внутрибольничные вспышки гастроэнтерита в палатах новорожденных. Начало острое, появляется понос, рвота, боли в животе, испражнения обильные, водянистые пенистые, ярко-желтого цвета. По тяжести различают: легкие, среднетяжелые и тяжелые формы в зависимости от выраженности диареи.

Лабораторная диагностика. Вирусные антигены в фекалиях определяют в ИФА, радиоиммунным методом, в реакции иммунофлуоресценции. Электронной или более чувствительной иммуноэлектронной микроскопией вирус выявляют в фекалиях больного через 7-8 дней от начала заболевания (в 1 г фекалий обнаруживается 10¹⁰ вирусных частиц).

Серодиагностика. Ставят РН, РСК, РТГА, ИФА с парными сыворотками.

Специфическая профилактика. Используется убитая вакцина.

Лечение ротавирусной диареи должно быть направлено на устранение дегидратации, восстановление и поддержание нормального водносолевого обмена.

20.1.6. Семейство рабдовирусов (Rhabdoviridae)

Семейство Rhabdoviridae включает более 60 вирусов, патогенных для млекопитающих, рыб, насекомых. В семействе выделяют два рода: Vesiculovirus и Lyssavirus. Наибольшую опасность для человека представляет вирус бешенства.

Рабдовирусы имеют пулевидную форму, размером 75-180 нм; спиральный тип симметрии, в состав генома входят однонитевая нефрагментированная (–)РНК. Наружная оболочка состоит из двойного липидного слоя, включающего внешние поверхностные гликопротеиновые структуры. Мембрану образуют поверхностный гликопротеин (G) и два негликозилированных белка (М₁ и М₂). Нуклеокапсид дополняют многочисленные копии протеина сердцевины (NP) и несколько копий вирусной транскриптазы, репликативный цикл проходит в цитоплазме клеток.

20.1.6.1. Вирус бешенства (Род Lyssavirus)

Бешенство – острая зоонозная инфекция ЦНС, возникающая после укусов бешеных животных, сопровождающаяся дегенерацией нейронов головного и спинного мозга. Без своевременно начатого после контакта с бешеным животным лечения летальность заболевания составляет 100%.

Заболевание распространено повсеместно за исключением островных государств.

Возбудитель относится к роду Lyssavirus (lyssa – бешенство). Вирусная этиология бешенства доказана в 1903 г. П. Ремленже.

Различают следующие варианты вируса бешенства: типичный, уличный вирус бешенства, который вызывает образование специфических включений в цитоплазме – телец Бабеша-Негри; вирус африканского собачьего бешенства; вирус американского бешенства летучих мышей; вирус дикования оленей, песцов, лис; фиксированный вирус бешенства (подвергнутый многократному пассированию на лабораторных животных и не способный поражать периферические нервы).

В 1885 г. Л. Пастер экспериментально обосновал способ аттенуации, он провел 133 пассажа дикого, уличного вируса бешенства через мозговую ткань кроликов и на 134 пассаже отметил изменение свойств исходного штамма – он утратил патогенность для собак и человека, инкубационный период сократился до 5 дней, не давал образование телец Бабеша-Негри, поэтому финкс-вирус использовали в качестве вакцины.

Антигенная структура. Все варианты вируса имеют один антигенный тип. Внутренний нуклеопротеин обусловливает групповую специфичность, выявляется в РСК, реакции преципитации в геле, иммунофлюоресценции. Гликопротеин внешней оболочки придает типовую специфичность (рис.26), выявляется в реакции нейтрализации и РТГА.

Культивирование. Вирус бешенства культивируют в мозговой ткани белых мышей, сирийских хомяков, кроликов, крыс, овец, в диплоидных клетках человека. У зараженных животных развиваются параличи конечностей, затем они погибают. Вирус может быть адаптирован к первичным культурам тканей и куриным эмбрионам. В цитоплазме клеток обнаруживаются ацидофильные включения – тельца Бабеша-Негри (впервые описаны В. Бабешем (1892) и А. Негри (1903). Они являются специфическими для данного заболевания.

Резистентность. Вирус бешенства быстро погибает под действием прямых солнечных лучей, УФ-лучей, фенола, хлорамина, йода, формалина, при 56^оС инактивация наступает в течении 60 минут, при 100^оС за 1 минуту. Длительно сохраняется при –20^оС, в условиях лиофилизации сохраняется годами.

Патогенез. Бешенство – инфекционное зоонозное заболевание, которое возникает после укуса человека бешеными животными (лисы, шакалы, волки, летучие мыши, собаки, кошки, рыси). В настоящее время заражение чаще всего происходит от лис и кошек. Вирус передается при укусах и попадании слюны на поврежденные кожные покровы и слизистую оболочку. В месте входных ворот вирус остается несколько дней.

Первичная репродукция происходит в клетках мышечной и соединительной ткани на месте укуса, а затем вирусные частицы достигают окончаний чувствительных периферических нервов и передвигаются по осевым цилиндрам и периневральным пространствам (до 3 мм в час), поражая нейроны спинного и головного мозга, в том числе нервные узлы некоторых железистых органов, особенно слюнных желез (рис.27).

Происходит демиелинизация белого вещества, т.е. идет перестройка мозговой ткани в связи с изменением в ней количества миелина. Вирус репродуцируется в нейронах и в результате в цитоплазме появляются тельца Бабеша-Негри, которые содержат вирусные нуклеокапсиды. Особенно интенсивно поражаются нейроны аммонова рога продолговатого мозга, клетки Пуркинье мозжечка, что ведет к глубокому расстройству ЦНС.

Клинические проявления.Инкубационный период варьирует и зависит от вирулентности штамма, места укуса, его массивности, от различной скорости продвижения вируса по нервным стволам.

Наиболее опасны укусы в лицо, голову, т.к. в этом случае наблюдается наиболее короткий инкубационный период (7-10 дней). При укусах в нижние конечности инкубационный период длится до 1,5 месяцев. Длительность инкубационного периода при бешенстве может колебаться от 7 дней до нескольких месяцев. В связи со способностью вируса бешенства персистировать в организме человека, оставаясь не выявленным иммунной системой, может происходить активация возбудителя под воздействием стрессовых факторов (хирургического вмешательства, электрического разряда и др.). наряду с инкубационным преиодом в несколько лет и затяжным клиническим течением (от 3 недель до нескольких месяцев), описаны случаи, когда длительность заболевания сокращалась до одного дня.

Продромальный период продолжается 2-4 дня. Основные симптомы в этой стадии заболевания: головная боль, тошнота, рвота, повышение температуры тела, изменение кожной чувствительности у входных ворот инфекции.

Вследствие поражения нервной системы отмечаются слезотечение, расширение зрачков, потливость, обильное слюноотделение. У больного отмечается болезненность при глотании, появляется чувство страха, особенно при виде воды – водобоязнь (hydrophobia), что сопровождается судорогами глотательных и дыхательных мышц. Провокация повторных приступов наступает под влиянием незначительного дуновения ветра – аэрофобия, яркого света – фотофобия, громкого разговора – акустикофобия; появляется агрессивность, буйство, в финальной стадии параличи мышц конечностей, языка, лица. Смерть наступает через 3-5 дней от начала заболевания от паралича дыхательного и сосудодвигательного центров.