Твердофазный иммунологический анализ.

Определение антител.

Содержание антител в сыворотке можно установить, используя их способность связываться с антигеном, адсорбированным на пластике (напри­мер, стенках пробирки или лунки микропанели). Количество связанных антител в дальнейшем определяют, добавив меченые анти-Ig, полученные от животного другого вида. В качестве примера - метод определения аутоантител к ДНК при системной красной волчанке. Когда сыворотку больного добавляют в лунку микропанели, на стенках которой предварительно адсорбировали антиген (в данном случае ДНК), аутоантитела связываются с антигеном, в то время как остальные белки сыворотки могут быть легко отмыты. Затем определяют количество связанных антител, добавляя меченные ¹²⁵1 очищенные антитела кролика к IgG человека, а затем удаляя избыток меченого реагента. Очевидно, что по радиоактивности, оставшейся в лунке, можно судить о количестве аутоантител в сыворотке больного. С помощью специфической антисыворотки можно определить и количество антител, принадлежащих к тому или иному изотипу иммуноглобулинов.

Ещё один пример, так называемый радио- аллергосорбентный тест для определения антител класса IgЕ у страдающих аллергией. Аллерген (например, экстракт пыльцы) иммобилизуют на сорбенте, в данном случае бумажном диске, который затем инкубируют с сывороткой больного. Количество связавшегося с бумагой специфического IgЕ затем определяют с помощью меченого анти- IgЕ.

Иммунорадиометрическое определение антигена.

Данный метод отличается от радиоиммунологического тем, что используют избыток меченого реагента. Для определения антигена твердую поверхность, например пластиковую, нагружают антителами и добавляют исследуемый раствор. После отмывания количество антигена, связавшегося с пластиком, можно определить, добавляя избыток радиоактивно меченных антител. Специфичность метода повышается при использовании «твердофазных» и меченых антител, направленных к разным участкам антигена:

Наиболее широко используется так называемый радиоиммуносорбентный тест для определения IgЕ. Кроличьи анти- IgЕ пришивают с помощью цианогенбромада к микрокристаллической целлюлозе и проводят реакцию с разведениями стандартной сыворотки, содержащей IgЕ, и исследуемой сыворотки больного. Количество связавшегося IgЕ затем определяют, добавляя меченые анти- IgЕ.