Агглютинация антигенов.

В то время как перекрестное связывание поливалентных белковых антигенов с помощью антител приводит к преципитации, взаимодействие антител с клетками или другими крупными частицами приводит к агглютинации последних. Поскольку большинство клеток несет электрический заряд, для преодоления их взаимного отталкивания и связывания между собой требуется довольно значительное количество антител. Поэтому агглюти­нация клеток, несущих небольшое количество детерминант, предусматривает применение специальных методов, например дополнительную обработку клеток антииммуноглобулинами.

Аналогично и поливалентные антитела класса М (IgМ), имеющие большую авидность по сравнению с IgG, более эффективны как агглютинирующие агенты.

Рис. 16. Механизм агглютинации нагруженных антигеном частиц с помощью антител. В результате перекрестного связывания частиц антителами образуются крупные макроскопические агрегаты. Для преодоления поверхностного электрического заряда эритроцитов требуется несколько поперечных перекрестных связей. IgМ более эффективны в реакции агглютинации, чем IgG, так как, во-первых, они поливалентны, а во-вторых, заряжевные клетки оказываются дальше друг от друга.

Рис. 17. Выявление аутоантител к тиреоглобулину в реакции гемагглютинации. Эритроциты, обработанные таннином и нагруженные тиреоглобулином, добавляют к сыворотке больных, взятой в различных разведениях. В качестве контроля используют сыворотку в разведении 1:10 и эритроциты, свободные от антигена. При положительной реакции эритроциты ровным слоем покрывают дно лунки. Поскольку лунки имеют V-образную форму, то при отсутствии реакции клетки оседают на дно лунки в виде маленькой, легко распознаваемой пуговки. Величина, обратная наибольшему разведению сыворотки, дающему четкую положительную реакцию, называется титром. Титры сывороток слева направо составляют 640, 20, > 5120, 0, 40, 320, 0, > 5120. Контроль для сыворотки № 46 оказался слегка положительным- эту сыворотку следует еще раз исследовать после истощения клетками, не нагруженными антигеном.

Рис. 18. Макроскопическая агглютинация латексных частиц, нагруженных IgG человека, под действием сыворотки больного ревматоидным артритом. Эта сыворотка содержит ревматоидные факторы аутоантитела, направленные к детерминантам IgG. а. Нормальная сывопотка. б. Сыворотка больного.

Реакция агглютинации используется для идентификации бактерий или типирования эритроцитов. Кроме того, удавалось наблюдать агглютинацию лейкоцитов, тромбоцитов и даже сперматозоидов в некоторых случаях мужского бесплодия, связанного с наличием антител (агглютининов) к сперматозоидам. Отличаясь чувствительностью и простотой, реакция агглютинации используется и для идентификации антител к растворимым антигенам, которыми нагружают различные частицы. Особенно часто для этой цели используют эритроциты, поскольку они легко могут быть нагружены белками после предварительной модификации их поверхности таннином или хлорным хромом или же при использовании бифункциональных сшивающих агентов, таких, как бисдиазобензидин. В последнее время в реакции агглютинации чаще всего используют крупные, легко осаждаемые эритроциты индюка. Реакцию обычно проводят в пластиковых планшетах (панелях); при этом легко наблюдать образование клеточного осадка на дне лунки; такой микровариант метода более чувствителен, чем традиционный, предусматривающий использование больших объемов. Для постановки реакций (в частности, при выявлении ревматоидных факторов) используют также инертные частицы, например бентонита или полистиролового латекса, которые нагружают антигенами.