Количественные методы -титрование бактериофагов.


1.Титрование бактериофагов на плотной питательной среде по Грациа.

Для титрования необходимы следующие компоненты:

1) Пробирки с различными разведениями бактериофага с полужидким агаром

2) ряд чашек Петри с МПА;

3) суточная бульонная культура чувствительная к фагу бактерий (E. сoli, S.aureus или др.тест-культуры).

Смешивают разведения фага с суточной бульонной культурой и выливают на поверхность МПА в чашку Петри, где она застывает в виде тонкой плёнки, в которой неподвижно фиксированы бактерии. Чашки инкубируют при 370 С в течение 18-24часов. При этом незаражённые бактерии, размножаясь, образуют сплошной газон роста на поверхности агара. Каждая инфицированная фагом бактерия лизируется. В результате на сплошном бактериальном газоне появляются четко очерченные зоны лизиса – негативные колонии.Число негативных колоний равно количеству жизнеспособных фаговых частиц в засеянной смеси.

Титр фага определяют по последней чашке, где появляются негативные колонии, то есть титром фага называется то максимальное разведение, при котором появляются негативные колонии.

2.Титрование бактериофага в жидких средах по Аппельману.

В 9 пробирках приготавливают десятикратные разведения исследуемой суспензии фага с МПБ. В качестве контроля берут МПБ без бактериофага. Во все пробирки добавляется по несколько мл культуры бактерий, например, E.сoli. Засеянные пробирки помещаются в термостат на 24 часа при 370 С, после чего отмечаются результаты опыта. Титром бактериофага называется то наибольшее его разведение, при котором наблюдается полный лизис бактерий (бульон остается прозрачным).

 

57. Использование бактериофагов в микробиологии и медицине. Реакции фаготипирования и фаголизиса.

Фаги используют в диагностике инфекционных болезней: с помощью известных (диагностических) фагов проводят идентификацию выделенных культур микроорганизмов. Вследствие высокой специфичности фагов можно определить вид возбудителя или варианты (типы) внутри вида.

Фаготипирование позволяет установить источник и пути распространения инфекции; – с помощью тест-культуры можно определить неизвестный фаг в исследуемом материале, что указывает на присутствие в нем соответствующих возбудителей.

Фаги применяют для лечения и профилактики инфекционных болезней. Производят брюшнотифозный, дизентерийный, синегнойный, стафилококковый фаги и комбинированные препараты. Способы введения в организм: местно, энтерально или парентерально.

Реакция фаголизиса

Реакция фаголизиса применяется для идентификации выделенной чистой культуры бактерий по фагочувствительности. Реакцию ставят в двух пробирках: №1 (опыт) и №2 (контроль). Реакция фаголизиса изучаем на примере идентификации выделенной чистой культуры S.sonnei из испражнения при подозрении на дизентерию.

Компоненты Опыт Контроль
1. МПБ 2.Исследуемая дизентерийная культура (S.sonnei) 3. Монофаг S. sonnei + + + + + -

Посевы инкубируют в термостате 18-24 часов при 370 С.

При наблюдении за посевами впервые часы бульон в пробирках слегка мутнеет вследствие размножения бактерий.

В дальнейшем в контрольной пробирке (без бактериофага) помутнение усиливается; в пробирке с бактериофагом через 6 часов происходит просветление в результате лизиса бактерий. Учет реакции проводятся по просветлению МПБ в результате лизируещего действия монофага на бактерии.

Реакция фаготипирования S.aureus

Определение фаготипа проводится с помощью специальных наборов типовых фагов и является одним из методов внутривидовой дифференциации бактерий. Реакция фаготипирования применяется с целью установления источников и путей передачи инфекции при госпитальных, кишечных заболеваниях и пищевых отравлениях.

Испытуемую суточную бульонную культуру S.aureus равномерно распределяют на поверхности подсушенного агара в чашке Петри. Дно чашки расчерчивают на 22 квадрата по числу фагов, затем капают фаги по одному в каждый квадрат. Посев инкубируют в термостате 18-24 часа при температуре 37°С.

На 2-й день проводят учёт результатов; фаготип культуры соответствует тому фагу, который вызывает её полный лизис. Также проводится фаготипирование брюшнотифозных (44 типа) и паратифозных бактерий (15 типов), энтеропатогенных эшерихий (24 типа).



Дата добавления: 2022-02-05; просмотров: 319;


Поиск по сайту:

Воспользовавшись поиском можно найти нужную информацию на сайте.

Поделитесь с друзьями:

Считаете данную информацию полезной, тогда расскажите друзьям в соц. сетях.
Poznayka.org - Познайка.Орг - 2016-2024 год. Материал предоставляется для ознакомительных и учебных целей.
Генерация страницы за: 0.007 сек.