Работа 3. Определение содержания гемоглобина в крови (метод Сали).

Определение гемоглобина по методу Сали производится методом визуальной колориметрии. Принцип метода заключается в том, что гемоглобин крови под влиянием соляной кислоты превращается в солянокислый гематин бурого цвета, интенсивность окраски которого сравнивают со стандартным раствором, находящимся в гемометре Сали.

Оснащение: гемометр Сали, стеклянная палочка, капилляр вместимостью 0,02 мл, 0,1 н. раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, глазная пипетка.

Ход работы: гемометр Сали представляет собой штатив с тремя гнездами. В крайние гнезда вставлены запаянные пробирки со стандартным раствором солянокислого гематина с содержанием гемоглобина в нем 166,7г/л (рис. 6а). В среднем гнезде находится градуированная пробирка (рис. 6б). Задняя стенка штатива закрыта матовым стеклом.

В среднюю пробирку гемометра до нижней круговой метки «2» внесите 0,1 N раствор соляной кислоты. Капилляром наберите 0,02 мл крови. Тщательно вытрите кончик капилляра снаружи. Внесите кровь на дно пробирки таким образом, чтобы верхний слой жидкости остался прозрачным. Повторными всасываниями и выдуваниями промойте капилляр верхним слоем жидкости.

Путем осторожного встряхивания содержимое пробирки перемешайте и оставьте стоять в течение 5 минут. Вследствие гемолиза и образования солянокислого гематина смесь становится прозрачной и буреет. Через 5 минут к исследуемой жидкости добавьте дистиллированную воду глазной пипеткой по каплям, каждый раз тщательно перемешивая смесь стеклянной палочкой. Разведение закончите, когда цвет жидкости сравняется с цветом стандартов. Цвет жидкости и стандартов необходимо сравнивать при дневном освещении в проходящем свете, держа гемометр в вытянутой руке на уровне глаз. Определите, какому делению шкалы соответствует нижний мениск жидкости. Цена деления шкалы соответствует 0,2. Концентрацию гемоглобина пересчитайте в граммах на 1 л (г/л), для чего полученные данные умножьте на 10.

Рис. 6. Гемометр Сали и капилляр

Оформление результатов работы:полученные результаты определения содержания гемоглобина занесите в тетрадь протоколов опытов, оцените их и сделайте вывод, сравнив с нормой.