Количественное определение витамина С

Количественное определение витамина С в исследуемом ма­териале осуществляют с помощью 2,6-дихлорфенолиндофенола, используя его титрованный раствор:

По количеству реактива, израсходованного на окисление витамина С, определяют содер­жание последнего в анализируемом материале.

Оборудование: бюретка на 25 мл – 1 шт., фарфоровая ступка с пестиком – 1 шт., бумажные фильтры «белая лента», весы – 1 шт., стеклянная воронка (для фильтрования) – 1 шт., скальпель – 1 шт., ножницы – 1 шт., мерные пипетки на 2 мл, 5 мл, 10 мл, 20 мл – по 1 шт., конические колбы на 100 мл 1 шт., стакан химический на 100-150 мл – 1 шт., мерные колбы на 100 мл – 2 шт., мерные цилиндры на 50 мл, 250 мл – по 1 шт., чашка Петри – 1 шт., стеклянная воронка – 1 шт. (для заполнения бюретки)

Реактивы: свежий растительный материал (морковь, картофель, капустный лист, груша или др.) – 1 шт., активированный уголь (для удаления пигментов добавляют к содержимому мерной колбы с экстрактом), песок кварцевый (для измельчения растительного материала в ступке), 5% раствор соляной кислоты, 0,5% раствор крахмала, 0,001 н. раствор 2,6-дихлорфенол-индофеиолята натрия, 2%-ный раствор серной кислоты, 0,1%-ный раствор аскорбиновой кислоты, 0,001 н. раствор иодата калия, 5%-ный раствор иодида калия, 3% раствор перекиси водорода, 0,001 н. раствор иодата калия.

Ход работы.Определение титра раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола

Установку титра приблизительно 0,001 н. раствора 2,6-дихлор­фенолиндофенола проводят по аскорбиновой кислоте в день работы.

Берут 2 мл 0,1%-ного раствора аскорбиновой кислоты и растворяют в 50 мл 2%-ного раствора серной кислоты. 5 мл этого раствора титруют 2,6-дихлор-фенолиндофенолом до появления розового окрашивания. Отмечают затраченный на титрование объем реагента.

Тотчас же после этого такой же объём раствора аскорбиновой кислоты титруют из другой бюретки титрованным раствором иодата калия (0,001 н.). К раствору аскорбиновой кислоты перед титрованием добавляют несколько кристаллов (не более 0,1 г) иодида калия и 5 капель 1%-ного раствора крахмала.

Титрование ведут осторожно до появления едва заметного синего окрашивания и отмечают затраченный на титрование объем иодата калия.

Поскольку в первом и во втором случае были оттитрованы одинаковые объемы ас­корбиновой кислоты, то, следовательно, количества затраченных иодата калия и реагента эквивалентны друг другу. Так как 1 мл 0,001 н. раствора иодата калия эквивалентен 0,088 мг аскорбиновой кислоты, то титр раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола (в миллиграммах аскорбиновой кислоты) равен:

Нарезают исследуемый материал (картофель, морковь) мелкими кусочками. 10 г материала переносят в ступку и тщательно растирают с небольшим количеством кварцевого песка, добавляя маленькими порциями 5%-ный раствор соляной кислоты до получения жидкой кашицы.

Смесь количественно переносят вмерную колбу на 100 мл. Ступку и пестик тщательно обмывают 5%-ным раствором соляной кислоты, которую сливают в ту же мерную колбу, следя за тем, чтобы были затрачены все 50 мл соляной кислоты (конечная концентрация ее должна быть 2,5%).

После этого содержимое мерной колбы доводят до мет­ки дистиллированной водой, хорошо перемешивают и фильтруют через складчатый фильтр или центрифугируют. Полученный экстракт должен быть совершенно прозрачным.

Определение содержания аскорбиновой кислоты в экстракте

В две конические колбочки на 50 мл берут пипеткой по 10 мл полученного экстракта растительного материала. В одной из проб разрушают витамин С кипячением в присутствии нескольких капель пероксида водорода.

Содержимое колб титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола. При наличии в экстракте витамина С раствор обесцвечивается, а при дальнейшем прибавле­нии индикатора окрашивается в розовый цвет, так как вся ас­корбиновая кислота в пробе уже окислена и краска более не вос­станавливается. В пробе, где витамин С был разрушен, от при­бавления нескольких капель индикатора появляется розовое окрашивание.

Результаты титрования записывают и повторяют работу с новой порцией того же экстракта. На основании средней величины титрования, полученной из 2-3 определений, вычисляют количество витамина С по формуле:

где С – содержание аскорбиновой кислоты (в мг%); Т – титр 2,6-дихлорфенолиндофенола в миллиграммах аскорбиновой кисло­ты; V – объем экстракта (в мл); а – масса исследуемого материала (в г); V₁ – затраченный объем реагента при ти­тровании (в мл); V₂ — объем титруемого раствора (в мл).

В результате находят количество витамина С в миллиграм­мах на 100 г исследуемого продукта. По данному методу опреде­ляют только восстановленную форму аскорбиновой кислоты.

__________________________

Приготовление растворов:

1) 2,6-дихлорфенолиндофенол (0,001 н.): в бюксе взвешивают 130 мг реактива и навеску количественно переносят в мерную колбу на 500 мл, смывая остатки на воронке и бюксе дистиллированной водой; добавляют10 капель 0,01 н. раствора гидроксида натрия и воду до половины колбы, раствор сильно перемешивают до растворения 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, а затем объём раствора в колбе доводят до метки водой; раствор перемешивают и фильтруют; полученный раствор хранят до 3-х суток в склянках из тёмного стекла;

2) иодат калия (0,001 н.): на аналитических весах взвешивают в бюксе 0,3568 г иодата калия и растворяют в мерной колбе на 1 л; полученный 0,01 н. раствор по мере надобности разбавляют дистиллированной водой в 10 раз и получают 0,001 н. раствор.