Исследование свойств амилазы слюны

<14 15 161718 19 20 >

Главное отличие ферментов от катализаторов небиологической природы состоит в исключительно высокой каталитической активности и ярко выраженной специфичности действия, что обусловлено особенностями строения и механизмом их действия.

Оборудование: пластиковые одноразовые стаканы (для слюны) – 1 шт., стеклянная воронка (для фильтрования) – 1 шт., пипетки для отбора проб (глазные пипетки) – по 2 шт., водяная баня автоматическая – 1 шт., мерные цилиндр на 50 мл – 1 шт., вата, мерные пипетки на 1 мл, на 5 мл – по 1 мл.

Реактивы: раствор Люголя (I₂ в KI), раствор разбавленной слюны (см. приготовление в тексте лабораторной работы), 0,5% раствор крахмала, 10% раствор соляной кислоты, 10% раствор гидроксида натрия, 3% раствор сульфата меди, % раствор хлорида натрия, фелингова жидкость, 1% раствор сахарозы, 1% раствор сульфата меди (II).

Ход работы.В восемь пробирок наливают по 5 мл 1%-ного раствора крахмала и по 1 мл слюны (заранее готовят, см. пропись). В пробирки добавляют:

- в 1-ую, 2-ю и 3-ью пробирки – по 1 мл дистиллированной воды,

- во 4-ую – 1 мл 10%-ной соляной кислоты,

- в 5-ую – 1 мл 10%-ной гидроксида натрия;

- в 6-ую – 1 мл 1%-ного хлорида натрия;

- в 7-ую – 1 мл 1%-ного сульфата меди (II).

В 8-ую пробирку наливают 5 мл 1%-ного раствора сахарозы и по 1 мл слюны.

Пробирку №1 оставляют при комнатной температуре, а содержимое пробирки №2 кипятят. Пробирки со 3 по 8 после перемешивания помещают в водяную баню при 38°С. Через 15-20 мин. все пробирки вынимают из водяной бани, охлаждают и из каждой берут пробы для определения в них крахмала и глюкозы: первой – по реакции с йодом, второй – по реакции Троммера. По 2-3 капли растворов переносят из каждой пробирки в пробирки с ранее внесённой каплей раствора йода в иодиде калия, после чего капли перемешивают. По интенсивности окраски пробы делают заключение о степени гидролиза крахмала. Для определения глюкозы из каждой пробирки берут по 2-3 мл раствора, добавляют 1 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия и несколько капель 1%-ного раствора сульфата меди (II). Верхний слой жидкости нагревают до кипения. Появление жёлтого осадка оксида меди (I) или красного металлической меди указывает на наличие глюкозы.

Результаты опыта заносят в таблицу 3.

Таблица 3. Влияние разных факторов на активность ферментов

№ про-бирки	Субстрат	Фермент	Температура	Дополнительные условия проведения опыта	После инкубации
проба с иодом	проба Троммера
	Крахмал Крахмал Крахмал Крахмал Крахмал Крахмал Крахмал Сахароза	Амилаза Амилаза Амилаза Амилаза Амилаза Амилаза Амилаза Амилаза	t= 15-20^оС t= 100^оС t= 38^оС t= 38^оС t= 38^оС t= 38^оС t= 38^оС t= 38^оС	- - - 10% р-р HCl 10% р-р NaOH 1% р-р NaCl 1% р-р CuSO₄ -