Выделение флавоноидов из растительного сырья

Приготовление экстракта. Экстракт из плодов или ягод. Для приготовления водного экстракта 2,5 г высушенного измельченного растительного сырья помещают в колбу, добавляют 25 мл воды, проводят экстракцию на кипящей водяной бане в течение 20 минут. Содержимое колбы охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр. Полученный экстракт используется для дальнейшего анализа.

Экстракт из чёрного чая.К 100 мг чая приливают 50 мл горячей дистиллированной воды и проводят экстракцию в течение 5 минут.

Качественный анализ содержания флавоноидов в растительном сырье

Общей реакции, специфической для всех классов флавоноидов, не существует. Наиболее часто для обнаружения флавоноидов применяют цианидиновую реакцию (проба Chinoda):

1. Цианидиновая реакция. К исследуемому раствору добавьте цинк и концентрированную соляную кислоту.

Реакция основана на восстановлении флавоноидов атомарным водородом в кислой среде до антоцианидинов. Флавонолы и флавонол-3-гликозидыдают ярко-розовое, красное или оранжевое окрашивание.Цианидиновую реакцию не дают халконы, ауроны, катехины, антоцианидины.

2. Реакция с 1% раствором хлорида алюминия. К исследуемому раствору добавьте 1-2 мл 1% раствора хлорида алюминия.

Флавоноиды, имеющие две оксигруппы в С₃ и С₅ положениях дают хелаты желтого цвета за счет образования водородных связей между карбонильной и гидроксильными группами [2]. Раствор окрашивается в желтый цвет.

3. Реакция с раствором аммиака (или другим щелочным раствором, например, гидрокарбонатом натрия или щёлочью). К исследуемому раствору добавьте 1-2 мл 25% раствора аммиака. Флавоны, флавонолы, флаваноны приобретают желтое окрашивание, при нагревании переходящее в оранжевое или красное; халконы и ауроны – оранжевое или красное окрашивание. Антоцианы образуют синее или фиолетовое окрашивание.

4. Реакции с солями железа (III). К исследуемому раствору добавьте 1-2 мл 10% раствора хлорида железа (III).

Появляется окраска от зеленой (флавонолы) до коричневой (флаваноны, халконы, ауроны) и красновато-бурой (флавоны).

5. Реакции с ацетатом свинца (II) (или нитратом свинца(II)). К исследуемому раствору добавьте 1-2 мл 10% раствора ацетата свинца (II) (или нитратом свинца (II)).

Флавоны, халконы, ауроны, содержащие свободные орто-гидроксильные группы в кольце В образуют осадки, окрашенные в ярко-желтый или красный цвета. Антоцианы образуют осадки, окрашенные как в красный, так и синий цвет.

Количественное определение витамина Р

Экстракцию проводат в течение 5 минут. Затем 10 мл экстракта чая отмеривают в коническую колбу, добавляют 10 мл дистиллированной воды и 5 капель индигокармина (появляется синее окрашивание). Титруют из бюретки 0,05 н. раствором КМnO₄ до появления устойчивой жёлтой окраски.

Определяют процентное содержание рутина в чае. Расчёт проводят по следующей формуле:

x = 3,2 ∙ A ∙ V₁ ∙ 100

V₂ ∙ P ∙ 1000

где х – содержание витамина Р в препарате, %; 3,2 – стандартный пересчётный коэффициент; А – количество титранта, мл, V₁ – объем, в котором растворена взятая для анализа навеска, мл, 100 – общее количество вещества для расчета процентного содержания, г; V₂ – объем раствора, взятого для титрования, мл, Р – навеска, мг; 1000 – перевод мкг в мг.