Молекулярные механизмы инактивации Х-хромосомы

Выявлено, что Х-хромосома инактивируется не полностью, и в ней сохраняются генетически активные локусы. Объяснением этому может служить тот факт, что часть генов X-хромосомы имеет гомологичные гены на хромосоме Y и не требует компенсации дозы. К ним относятся гены из псевдоаутосомальной области (PAR), расположенной в сегменте Хр22- pter и имеющей размеры около 2Mb, и ряд других генов, например:

- ген STS, кодирующий стероид-сульфатазу;

- ген MIC-2, расположенный вблизи псевдоаутосомальной облачи,

- гены DXS, U23E, UBEI проксимального участка короткого плеча;

- ген RPS4X, контролирующий синтез рибосомного белка S4 и расположенный в проксимальной части длинного плеча.

Молекулярно-биологические исследования позволили выявить в хромосоме X участок - (ql3), который вовлечен в процесс инактивации и, поэтому назван центром инактивации хромосомы X (ХIС).В этом участке расположен ген XIST, который был изучен и клонирован с использованием искусственной дрожжевой хромосомы YAC. Ген XIST имеет длину около 450 Кb. Конец 3´гена участвует в «подсчете» числа хромосом Х и определяет, какая именно хромосома Х останется активной. На 5´-конце гена расположен промотр с тремя областями:

- активирующей областью, длиной около 100pb;

- областью, состоящей из множества повторов одной и той же последовательности и обеспечивающей стабилизацию РНК- XIST на уровне неактивной хромосомы;

- областью, образованной повторами CG, расположенной на расстоянии 25Кb от транскрибируемой области гена и оказывающей ингибирующее действие на активирующую область промотора.

Ген XIST относится к нетипичным генам, т.к. он утратил способность экспрессироваться в виде белка. Его экспрессия завершается синтезом мРНК, длиной около Kb, которая остается связанной с генетически неактивной хромосомой X.

Путем экспериментального трансгенеза было показано, что ген XIST, будучи встроенным в одну из аутосом, способен индуцировать процесс хромосомной инактивации с образованием гетерохроматина. Методом FISH обнаружено наличие на аутосоме, в которую был встроен данный ген, молекулы PHK-XIST, которая и вызывает инактивацию аутосомных генов. Кроме того, было выявлено, что аутосома со встроенным генов XIST гипоацетилирована на уровне гистона Н4 и имеет новый тип гистона - макроН2А1. Результаты других исследований позволяют предположить, что механизм инактивации зависит от стабильности молекулы PHK-XIST на неактивной хромосоме X. Стабильная и нестабильная формы РНК переписываются с участием разных промоторов одного и того же гена. Регуляцию экспрессии гена XIST можно объяснить на основе явления геномного импринтинга. Геномный импринтинг - это подавление активности одного из двух аллелей гена в зависимости от родительского происхождения, которое происходит в гаметогенезе и представляет один из механизмов регуляции фенотипической экспрессии генов.

ПОЛОВОЙ ХРОМАТИН X

Хроматин X - это небольшое тельце, которое интенсивно окрашивается основными красителями и выявляется в интерфазных ядрах соматических клеток млекопитающих и человека - непосредственно под ядерной оболочкой.

Хроматин X впервые обнаружили в 1949 г. М. Барр и Ч. Бертрам, в ядрах нейронов кошки, причем, только в клетках самок. В дальнейшем было показано наличие хроматина X и у других млекопитающих, в том числе человека Происхождение и значение полового хроматина X получило свое объяснение позднее, в гипотезе М. Лайон (1961).

Хроматин X может быть определен в любых тканях, однако чаще всего используются эпителиальные клетки слизистой полости рта (тест Барра)и клетки периферической крови. Иногда используются клетки волосяной луковицы. В качестве Х-хроматина учитывается самый большой хромоцентр, прилегающий к ядерной мембране. Анализ результатов основан на установлении числа телец хроматина X, которое коррелирует с количеством Х-хромосом.