Изучение метафазных хромосом
Оптимальным этапом для изучения хромосом является стадия метафазы, когда хромосомы достигают максимальной конденсациии располагаются в одной плоскости,что позволяет их идентифицировать с высокой точностью. Для изучения кариотипа требуется выполнение нескольких условий:
- стимуляция клеточных делений для получения максимального количества делящихся клеток,
- блокирование клеточного деления в метафазе;
- гипотонизацш клеток и приготовление препарата хромосом для дальнейшего исследования под микроскопом.
Для изучения хромосом можно использовать клетки из активно пролиферирующих тканей(клетки костного мозга, стенок семенников, опухолей) или клеточные культуры,которые получают путём культивирования в контролируемых условиях на специальных питательных средах клеток, выделенных из организма (клетки периферической крови*, лимфоциты Т, клетки красного костного мозга, фибробласты разного происхождения, клетки хориона, опухолевые клетки)
* Техника получения хромосомных препаратов из лимфоцитов периферической крови, культивируемых в изолированных условиях является наиболее простым методом и состоит из следующих этапов:
- забор венозной крови в асептических условиях;
- добавление гепарина для предотвращения свертывания крови;
- перенос материала во флаконы со специальной питательной средой;
- стимуляция клеточных делений добавлением фитогемагглютинина;
- инкубация культуры в течение 72 часов при температуре 370С.
Блокирование клеточного деления на стадии метафазы достигается введением в среду колхицина или колцемида – веществ - цитостатиков, разрушающих веретено деления. Получение препаратов для микроскопическогоанализа включает следующие этапы:
- гипотонизацю клеток, которая достигается добавлением гипотонического раствора хлорида калия; это приводит к набуханию клетки, разрыву ядерной оболочки и дисперсии хромосом;
- фиксацию клеток для остановки жизнедеятельности клетки с сохранением структуры хромосом; для этого используются специальные фиксаторы, например, смесь этилового спирта и уксусной кислоты;
- окрашивание препарата по Гимзе или использование других способов окрашивания;
- анализ под микроскопом с целью выявления численных нарушений (гомогенных или в мозаике) и структурных аберраций;
- фотографирование и вырезание хромосом;
- идентификацию хромосом и составление кариограммы (идиограммы).
Дата добавления: 2017-09-01; просмотров: 1301;