Простая радиальная иммунодиффузия.

Когда антиген диффундирует из лунки в агар, содержащий довольно разбавленную антисыворотку, то первоначально его концентрация относительно высока, и при взаимодействии антигена с антителами образуются растворимые комплексы. По мере дальнейшей диффузии концентрация антигена постепенно падает, и при соотношении антигена и антител, близком к оптимальному, образуется кольцо преципитации. Чем выше концентрация внесенного в лунку антигена, тем больше диаметр кольца (рис.5).

Рис. 5. Простая радиальная иммунодиффузия: соответствие между концентрацией антигена и диаметром кольца преципитации. Кольцо преципитации образуется при оптимальном соотношении антигена и антител. Чем выше концентрация антигена, тем на большее расстояние он продиффундирует до того, как сформируется кольцо, и тем шире будет диаметр этого кольца.

Если в реакции использовать, скажем, три стандарта с известной концентрацией антигена, то можно получить калибровочную кривую и применять ее для количественного определения антигена в неизвестных образцах (рис.6). Такой подход постоянно используется в клинической иммунологии, в частности для определения концентрации иммуногло­булинов, компонента комплемента С3, трансферрина, С-реактивного белка и эмбрионального белка ά -фетопротеина, который появляется в крови при некоторых опухолях печени.

Рис.6. Определение концентрации IgG в сыворотке методом простой радиальной иммунодиффузии. Диаметры колец, образуемых при использовании стандартных препаратов (красные кружки), позволяют построить калибровочную кривую, с помощью которой можно определить концентрацию IgG в исследуемой сыворотке.

Рис. 7. Т1-сыворотка больного миеломой, продуцирующей IgG; 15 мг/мл. Т2-сыворотка больного гипогаммаглобулинемией; 2.6 мг/мл. Т3- нормальная сыворотка; 9,6 мг/мл.

В этом случае антитела добавляют в расплавленный агар. После застывания исследуемый материал помещают в лунки. Если материал содержит искомый антиген, вокруг лунки возникнет кольцо преципитата. Возникает оно на некотором расстоянии от лунки в зоне эквивалентности. Чем больше антигена, тем дальше кольцо. Существует линейная зависимость между квадратом диаметра кольца и концентрацией антигена. Построение калибровочной линии по антигенному стандарту дает возможность количественно весьма точно определять концентрацию антигена. Этим методом пользуются в клиниках для определения концентрации иммуноглобулинов различных классов в крови людей. Проведение предварительного электрофореза в агаре многокомпонентного субстрата, например сыворотки крови или тканевого экстракта, с последующим проявлением компонентов антисывороткой обеспечивает высокие аналитические воз­можности. Этот вариант, получивший название иммуноэлектрофореза, разработан П. Грабаром (1963).