Взятие крови у лабораторных животных и ее обработка

Небольшое количество крови получают у кроликов и мор­ских свинок из вен уха, у мышей и крыс—из вен хвоста, а большие количества — из сердца. В особых случаях прибега­ют к полному, или тотальному, обескровливанию, после кото­рого животное погибает.

Для пункции сердца животных фиксируют к доске брюш­ком кверху. Шерсть в области груди тщательно выстригают, кожу обрабатывают спиртовым раствором йода и после этого приступают к проколу, который в зависимости от вида жи­вотного имеет некоторые различия.

Пункция сердца кроликов. Определяют II пальцем, обра­ботанным спиртом и смазанным спиртовым раствором йода, сердечный толчок, т. е. точку наиболее сильно выраженной пульсации сердца. Обычно она прощупывается в третьем межреберье. Прокол грудной клетки делают в области сер­дечного толчка на расстоянии 2—4 мм от левого края гру­дины; иглу ведут в направлении к средней линии на глубину 2—2,5 см. При попадании иглы в полость сердца рука, в ко­торой находится шприц, начинает ощущать ритмичные толч­ки, связанные с пульсацией сердца и приподнимающие иглу. Поршень шприца легко выдвигается наружу и в цилиндре его тотчас появляется кровь. Взятие крови должно произво­диться по возможности быстрее во избежание ее свертыва­ния. По этой же причине шприц и иглу рекомендуется промы­вать перед опытом стерильным раствором цитрата или оксалата натрия. Взяв необходимое количество крови, быстрым движением, без рывка, вынимают иглу и на месте укола на­кладывают ватный тампон, пропитанный спиртовым раство­ром йода. Животному подкожно вводят подогретый до тем­пературы тела стерильный изотонический раствор хлорида натрия или глюкозу в количестве, равном двойному объему взятой крови. Пункцией сердца можно получить у кролика 25—30 мл крови.

Пункция сердца у морских свинок. Кончиками III—IV пальцев левой руки нащупывают сердечный толчок, в на­правлении которого вертикально на глубину 1,5—2 см вка­тывают иглу, отступя на 1—2 мм от левого края грудины. У морских свинок можно получить таким образом 10—12 мл крови.

Пункция сердца у крыс. Как и в предыдущих случаях, пальпаторно определяют место сердечного толчка. На 1 см выше от установленной точки и на 1—2 мм левее от края гру­дины делают прокол на глубину 1,5—2 см, держа иглу вер­тикально. Одномоментно у крыс можно получить 6—8 мл крови.

Тотальное обескровливание кролика. Вскрывают одну из сонных артерий, расположенных по обеим сторонам трахеи. Для получения стерильной крови руки оперируемого должны быть тщательно вымыты и обработаны спиртом или спирто­вым раствором йода, все инструменты предварительно необ­ходимо простерилизовать.

Подготовленного для кровопускания кролика привязывают станку брюшком кверху, фиксируя голову кольцом к штативу. Шерсть на шее тщательно выстригают, кожу дезинфи­цируют. К носу животного прикладывают кусочек ваты, смо­ченной эфиром. После того как наступит состояние наркоза, скальпелем делают разрез по средней линии шеи и разводят края раны пинцетом. Сонные артерии проходят по бокам тра­хеи в яремном желобке между веной и нервом. Сверху артерия прикрыта грудино-подъязычной и грудино-щитовидной мышцами. Поэтому для обнаружения нервно-сосудистого пучка эти мышцы разделяют тупым концом скальпеля или браншами пинцета. Артерию освобождают от окружающей соединительной ткани и подводят под нее две лигатуры. Ближай­шую к головке лигатуру завязывают двойным узлом, позади второй лигатуры на расстоянии 0,3—0,5 см накладывают пе­ан. Между лигатурой и пеаном маленькими остроконечными ножницами делают продольный разрез сосуда длиной не бо­лее 1,5—2 мм, вставляя в него канюлю (стеклянную трубочку с оттянутым капилляром, кончик которой скошен и хорошо оплавлен). Кончик вставленной канюли укрепляют второй лигатурой. После этого под резиновую трубку, надетую на расширенную часть канюли, подставляют пробирку или фла­кон и снимают пеан с артерии, чтобы кровь могла вытекать свободно. Обескровливание морских свинок про­изводят так же, как и кроликов.

Взятие крови из вены уха кролика. Для получения крови из краевой вены нужно, прежде всего, вызвать гиперемию уха, потирая его ладонями рук и слегка ударяя кончиками паль­цев. Затем вдоль наружного края уха удаляют пушок и про­тирают ватой, увлажненной 70% спиртом. Если в результате всех перечисленных процедур сосуды не инъецируются, ухо смазывают ксилолом или толуолом. После того как сосуды набухнут и четко обозначатся на поверхности ушной ракови­ны, наружную поверхность ее покрывают тонким слоем жид­кого парафина (во избежание быстрого свертывания крови) и делают прокол вены.

Для получения небольшого количества крови (менее 1 мл) прокалывают одну из небольших периферических ветвей, а для получения больших объемов крови (5—10 мл) вскрывают краевую вену уха. С этой целью иглу шприца вводят в вену почти параллельно поверхности уха, чтобы не повредить про­тивоположную стенку вены. При проколе вены иглой шприца кровь, как правило, выходит отдельными каплями с боль­шими интервалами, и кровотечение прекращается быстро. Для того, чтобы вызвать обильное кровотечение, нужно сде­лать ранку с рваными краями. С этой целью пользуются об­ломком тонкого капилляра пастеровской пипетки. При таком способе прокола из уха кролика получают до 30 мл крови. После взятия крови к проколу вены прикладывают на 2—3 минуты кусочек сухой стерильной ваты, не нажимая сильно на стенку сосуда, так как при этом кровотечение может усилиться. Если кровотечение долго не прекращается, хорошие ре­зультаты дает нанесение на ранку нескольких капель пе­рекиси водорода.

Взятие крови из вен у морских свинок, крыс и мышей. У морских свинок кровь в количестве 0,3—0,5 мл получают после нанесения насечек на край уха или прокола мягких по­душек лапы.

У белых крыс и мышей для получения 1—3 капель кро­ви приходится прибегать к ампутации кончика хвоста пос­ле продолжительного прогревания его в воде температуры 45—50°С или протирания ксилолом. Взяв кровь, рану прижигают перекисью водорода.

Есть способ, позволяющий получить у крыс 0,5—1 мл крови из венозного сплетения, ле­жащего в орбите, позади глазного яблока. Взятие крови про­изводят стеклянной пипеткой с оттянутым капилляром (на­ружный диаметр 0,6 мл), острие которого сточено под уг­лом 45°.

Животное берут I и II пальцами левой руки со стороны спины за шею и слегка сдавливают с боков, вызывая легкое выпячивание глаз. Вращательным движением пипетки дела­ют прокол конъюнктивального мешка в медиальном углу гла­за между глазным яблоком и орбитой. После прокола пипет­ку ведут в направлении гортани на глубину 4—5 мм. Попа­дание в венозное сплетение сопровождается заполнением ка­пилляра пипетки кровью.

Получение дефибринированной крови. Кровь животного сливают в стерильную колбу со стеклянными бу­сами и непрерывно в течение 10—15 мин встряхивают. В ре­зультате встряхивания находящийся в крови фибрин выпада­ет в осадок, обволакивая бусы, а дефибринированная кровь, слитая в другую колбу или пробирку, утрачивает способ­ность свертываться.

Приготовление взвеси эритроцитов. Для ос­вобождения от пленок фибрина дефибринированную кровь фильтруют через трехслойный марлевый фильтр. Фильтрат наливают в центрифужные пробирки и центрифугируют при 2000—3000 об./мин. в течение 10—15 минут. Эритроциты оседают на дно пробирки, а прозрачная, слегка желтоватого цвета плазма образует надосадочный слой. После центрифугирова­ния уровень жидкости в пробирке отмечают карандашом, от­сасывают плазму пастеровской пипеткой, эритроциты промы­вают, доливая до метки стерильный изотонический раствор хлорида натрия, и вновь центрифугируют. Промывание эрит­роцитов с добавлением свежего раствора производят 2—3 разa, чтобы последняя порция промывной жидкости была бес­цветна.

Из промытых эритроцитов готовят 3% или 5% взвесь, прибавляя к 3—5 мл эритроцитов соответственно 97—95 мл изо­тонического раствора хлорида натрия (для получения мень­ших количеств взвеси объемы обоих ингредиентов уменьша­ют в одинаковое число раз).

Взвесь эритроцитов можно хранить в холодильнике при температуре 3—4°С в течение 5—6 дней.

Приготовление сыворотки крови.Кровь, со­бранную в стерильную пробирку, закрывают ватно-марлевой пробкой, ставят на 20—30 мин в термостат или водяную ба­ню, отрегулированную на 37°С, так как в тепле кровь свер­тывается быстрее и лучше. Во время свертывания сгусток крови обычно прилипает к стенкам пробирки. Поэтому после взятия пробирок из термостата сгусток отделяют от стенок пробирки круговым движением капилляра стерильной пасте­ровской пипетки или стеклянной стерильной палочкой.

После отделения сгустка сыворотку ставят в холодильник при температуре 3—4°С. В течение 3—4 ч сыворотка обычно отделяется полностью, и ее можно отсосать стерильной пасте­ровской пипеткой. Для того чтобы во время отсасывания со­держимое пробирки было хорошо видно, пастеровскую пи­петку соединяют со стеклянной трубкой — «мундштуком» (ре­зиновая трубка длиной 20—25 см). При отсасывании кончик пипетки не должен соприкасаться со сгустком крови, чтобы в сыворотку не попали эритроциты.

Окрашенную в розовый цвет сыворотку центрифугируют при 2000—3000 об./мин. в течение 10—15 мин для осаждения форменных элементов крови.

При взятии крови вскоре после кормления животных, а также при повторных кровопусканиях с короткими интерва­лами возникает иногда липемия, т. е. появление избытка жи­ровых веществ в крови. Сыворотки, получаемые во время липемии, бывают мутные (хилезные), иногда опалесцирующие, и это очень затрудняет чтение диагностических реакций, осо­бенно реакции преципитации. Во избежание получения мут­ных сывороток кровь у животных берут натощак. Просветле­ние липемической плазмы наступает также при введении в кровеносное русло животного гепарина, способствующего по­вышению концентрации в крови фермента, называемого фак­тором просветления. С этой целью кроликам весом 2—2,5 кг в краевую вену уха вводят за 1—1,5 ч до обескровливания 60 мг гепарина.

Форменные элементы из крови удаляют центрифугирова­нием. В слитой с осадка плазме через короткое время после центрифугирования образуется сгусток фибрина, который уп­лотняется при перемешивании крови стеклянной палочкой. Затем этот сгусток удаляют. В некоторых случаях фибрин из плазмы выпадает не полностью. Для удаления остатков фиб­рина и выявления полноты его удаления к сыворотке при­бавляют несколько капель тромбина. Освобожденную от фиб­рина сыворотку фильтруют через асбестовые фильтры. Полу­ченная таким способом сыворотка совершенно прозрачна и не имеет признаков опалесценции.

Приготовление цитратной крови. Полученную из сердца или вены кровь сливают в пробирку с 5% раство­ром цитрата натрия (10 мл крови, 1 мл цитрата натрия). Цитратная кровь не свертывается.

Приготовление плазмы крови. Цитратную кровь ставят на 18—20 ч в холодильник или подвергают центрифу­гированию. В результате над осадком эритроцитов образуется прозрачный слой жидкости желтоватого цвета—плазмы.