Определение вирулентности микробов

Вирулентность — биологическое свойство микроба, харак­теризующее степень его патогенности в момент исследования. В отличие от патогенности вирулентность является не видо­вым, а индивидуальным признаком микроба, который может усиливаться или ослабляться вплоть до полного исчезнове­ния под влиянием различных факторов внешней среды.

Для характеристики вирулентности пользуются количест­венными показателями, определяющими способность иссле­дуемой микробной культуры вызывать гибель искусственно зараженных ею подопытных животных. Изучение вирулент­ности бывает сопряжено с рядом трудностей, так как она оп­ределяется не только комплексом культурно-морфологиче­ских, токсигенных и биологических свойств микроба, но и резистентностью микроорганизма, подверженной большим колебаниям в связи с видом, возрастом животных, режимом их питания, температурой внешней среды, а также способом заражения, принятым в опыте. Поэтому при установлении ви­рулентности микроба очень важно вести исследование, точно соблюдая стандартность всех условий опыта.

Для определения вирулентности микробных культур чаще всего используют белых мышей. В том случае, когда белые мыши невосприимчивы к исследуемому возбудителю заболева­ния, пользуются другими видами животных: крысами, морс­кими свинками или кроликами.

Для определения вирулентности применяют молодую культуру микроба, так как старые культуры содержат боль­шое количество мертвых клеток.

Культуру микроба для заражения выращивают на мясо-пептонном агаре или другой плотной питательной среде, так как бульон, представляя собой сложный белковый субстрат, небезразличен для животного организма и может извращать результаты опыта. Исследуемую культуру микроба, выра­щенную на скошенном мясо-пептонном агаре, смывают изото­ническим раствором хлорида натрия и стандартизуют по оптическому стандарту так, чтобы в 1 мл этого раствора содер­жалось определенное количество микробных тел. В зависимо­сти от вида культуры, патогенности ее для животных, взятых в опыт, а также от цели и задач исследования количест­во микробных тел, содержащееся в 1 мл взвеси, может коле­баться от единиц до миллиардов. В тех случаях, когда по ка­ким-либо причинам получить агаровую культуру невозможно, пользуются суточной бульонной культурой. Для определения минимальной летальной дозы из бульонной культуры готовят ряд последовательных десятикратных разведений: 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000 и т.д.

Исследуемую взвесь бактерий вводят различными спосо­бами: внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно, под­кожно, интраназально—в зависимости от целей и задач ис­следования.

Отстандартизованную взвесь микробов в изотоническом растворе хлорида натрия, а также разведения бульонной культуры готовят с таким расчетом, чтобы различные дозы микроба, используемые в опыте, содержались в одинаковых объемах жидкости.

Каждую дозу культуры вводят одновременно нескольким животным. При определении минимальной смертельной до­зы учитывают и отмечают в протоколе опыта следующие дан­ные:

• количество микробов, введенных в организм животного;
• способ их введения;
• масса тела зараженного животного;
• сроки гибели после заражения.

Степень вирулентности чаще всего характеризуют тремя следующими показателями:

1. Минимальная смертельная доза Dlm (Dosis letalis mi­nima), т.e. наименьшая доза микробов, которая при опреде­ленном способе заражения, в определенных условиях опы­та вызывает гибель около 95% подопытных животных.
2. Наименьшая безусловно смертельная доза Dll(Dosis lerie letalis) — наименьшая доза микробов, являющаяся смертельной для всех 100% животных, взятых в опыт.
3. Средняя смертельная доза микробов LD₅₀ (Dosis leta­lis 50%)—доза микробов, вызывающая гибель 50% зара­женных животных.

Показатель LD₅₀ позволяет получить более достоверные результаты, и потому он чаще других используется в практи­ке экспериментальных исследований.

В отличие от Dlm и Dll, определявшихся непосредственно по результатам опыта, LD₅₀ вычисляется путем довольно сложных математических расчетов. Более прост метод Кербера, в котором простота расчета удачно сочетается с доста­точно высокой точностью получаемых результатов.