БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ДИСБАКТЕРИОЗА КИШЕЧНИКА

Цель. Определение состава фекальной микрофлоры : выделение чистой культуры фекальных микроорганизмов и идентификация.

Исследуемый материал – различные разведения фекалий в физиологическом растворе от 10¹ до 10¹¹.

1-й этап.Получение изолированных колоний фекальной микрофлоры.

Ход работы.

1.Делают посевы соответствующих разведений испражнения на среды:

-для выявления анаэробных бифидобактерий необходимо делать посевы фекалий в разведениях от 10⁶ до 10¹¹ глубоким уколом в пробирки с полужидкой средой Блаурококка (печеночно-МПА с цистеином и лактозой);

- для выделения E.сoli - на среду Эндо (Левина),

-для выделения патогенных энтеробактерий (сальмонелл, шигелл и др.) – на среду Плоскирева,

-для выделения Proteus vulgaris - посев по Щукеевичу в конденсационную воду скошенного МПА,

-для выделения стафилококков с лецитиназной активностью – на желточно-солевой агар,

-для выделения гемолитических бактерий - на кровяной агар,

-для выделения грибов рода Кандида - на среду Сабуро и др.

2.Все посевы помещают в термостат при 37°С на 18-24 часа, Блаурококка – 48 час., за исключением среды Сабуро ( при 28-30°С на 3-5 дней).

2-й этап.Выделение чистой культуры.

Ход работы.

1. Подсчет колоний и макроскопическое описание их:

Выделение чистой культуры бифидобактерий является весьма трудоемким и практически необязательным, так как определение разведения, в котором обнаруживают бифидобактерий является вполне достаточным для оценки нормального или пониженного содержания их в фекалиях. Из посевов, в которых виден рост в виде помутнения всей среды или отдельных колоний, готовят мазки и окрашивают их по Граму. Обнаружение характерных грамположительных палочек с разветвлениями на концах в виде римской цифры V, с несколько утолщенными концами подтверждает их принадлежность к бифидобактериям (рис.24).

-на среде Эндо: определение общего количества E.сoli, подсчет лактозонегативных (бесцветных) и со слабовыраженными ферментативными свойствами (розывые) колоний (рис.25);

-на среде Плоскирева - бесцветных колоний патогенных энтеробактерий (сальмонелл, шигелл и др.);

-на скошенном МПА - рост Proteus vulgaris по всей поверхности;

-на желточно-солевой агаре - лецитиназная активность стафилококков проявляется в виде радужного помутнения вокруг колоний (рис.26);

-на кровяном агаре – колонии бактерий, обладающих гемолитической активностью;

-на среде Сабуро – колонии грибов рода Кандида округлой формы, выпуклые, с гладкой поверхностью, ровными краями, матового цвета. Из подозрительной колонии готовят неокрашенный препарат. При его микроскопии должны быть почкующиеся овальные клетки - псевдомицелии (почкующиеся клетки распалагаются в цепочку). Окрашиваются по Граму положительно.

2.Микроскопическое исследование колоний.

3.Пересев небольшой части колоний на скошенную среду.

4. Инкубация в термостате при 37°С в течение 18-24 часа.

3-й этап. Идентификация выделенной чистой культуры.

Ход работы.

1. Макроскопическое определение роста микробов.

2. Проверка на чистоту выделенной чистой культуры – микроскопическое исследование.

3. Окончательная идентификация по ферментативной активности путем пересева на диференциально-диагностические среды и по др. признакам.

4-й этап. Учет результатов идентификации и оформление заключения о наличие и степени дисбактериоза.