Приготовление почвенной суспензии

На стерильное часовое стекло стерильным шпателем (или алюминиевой ложкой) помещают 10 г почвы. Чтобы микроорганизмы не попали из воздуха при взвешивании, часовое стекло накрывают другим часовым стеклом (предварительно стекла тарируют и стерилизуют). Часовые стекла, шпатели, ложки стерилизуют проведением их над пламенем (фламбированием).

Навеску почвы переносят в колбу емкостью 250 мл, содержащую 90 мл стерилизованной водопроводной воды, взбалтывают в течение 10 мин, лучше на механической качалке, и дают отстояться грубым частицам почвы.

Затем методом разведения готовят суспензии, содержание разное количество почвы.

Одновременно со взятием 10 г почвы для анализа из средней пробы отбирают 10-20 г почвы для определения влажности, так как полученные данные пересчитывают на 1 г абсолютно сухой почвы.

1 мл суспензии в первой колбе, приготовленной тем или иным методом, соответствует разведению 10^-1. Последующие разведения (10^-2; 10^-3; 10^-4; 10^-5; 10^-6 и т.д.) лучше делать в колбах на 250 мл с 90 мл стерильной водопроводной воды.

Из каждого предыдущего разведения отдельной стерильной пипеткой берут 10 мл почвенной суспензии и переносят в следующую колбу, содержащую 90 мл воды. Каждый раз пипетку ополаскивают. Последующие колбы встряхивают в течение 1 мин.

Из полученных разведений проводят посев на плотных и жидких средах. Набор этих сред зависит от задач, которые ставят перед собой исследователи при бактериологическом анализе почвы.

Суспензии почвы на плотные питательные среды высевают преимущественно поверхностно. Для этого агаризованные питательные среды разливают в стерильные чашки Петри и после охлаждения на поверхность агаровой пластины стерильной градуированной пипеткой наносят 0,05 мл почвенной суспензии из соответствующего разведения, затем стеклянным шпателем Дригальского растирают каплю досуха, при этом открытую чашку держат в вертикальном положении около пламени горелки. Посев из каждого разведения проводят минимум на 2-3 параллельных чашках.

В случае глубинного посева берут 1 мл почвенной суспензии из более высокого разведения (соответственно на один порядок выше), чем для поверхностного посева. Суспензию вносят в стерильную чашку Петри, заливают расплавленным и охлажденным до 45⁰ агаром. При глубинном посеве численность выявляемых бактерий меньше, чем при поверхностном.

При учете микроорганизмов почвы в жидких средах их (среды) разливают в колбы и стерилизуют. Из каждого разведения засевают минимум 2 пробирки (лучше 3-5, начиная с самого высокого), для чего стерильной пипеткой берут 1 мл суспензии и переносят в жидкую среду. После определенного срока инкубации при температуре 28-30⁰ культуры анализируют.