Материалы и оборудование

Стандартные диски из фильтровальной бумаги, пропитанные различными антибиотиками, стерильные чашки Петри, культуры исследуемых микроорганизмов, стерильные пипетки на 20 мл и пастеровские пипетки, пинцеты, линейки.

РАБОТА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРОБИОЦЕНОЗОВ ПОЧВЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЕЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

Цель - ознакомить с существующими методами исследования микробиоценозов почвы, применяемых при качественной и количественной характеристике антропогенных приемов воздействия на почву. В зависимости от стоящих перед исследователем задач следует применять разные методы исследований.

Исследование микробоценозов почвы методом обрастания стекол по Холодному - Росси

Ход работы

Принцип метода - максимально приблизить изучение процесса микробоценоза к условиям естественной среды обитания. Стекла помещают в почву на определенный промежуток времени и они, становясь как бы частью почвы, зарастают колониями микроорганизмов.

При постановке опыта на ровной поверхности почвы делают разрез ножом, глубина его зависит от исследуемого почвенного горизонта. Отмытые и обезжиренные стекла плотно прикладывают к вертикальной стенке разреза. Одновременно закапывают несколько стекол, плотно прижимая их к стенке. В пахотном слое стекла закапывают на глубину 3-5 см. Сверху разрез закрывают почвой, и место, где заложено стекло, помечают этикеткой. Стекла выдерживают в почве в зависимости от задачи исследования (от недели до нескольких месяцев).

Почву откапывают с тыльной стороны стекла, стекло осторожно вынимают. Поверхность стекла, обращенную к стенке почвы, высушивают на воздухе и фиксируют на пламени горелки. После фиксации стекло погружают в воду верхней стороной вниз, не доводя до дна.

Крупные частицы почвы, отмокая, падают на дно, а фиксированные микроорганизмы и мелкие частицы остаются на стекле. После промывки препарат погружают в раствор карболового эритрозина и выдерживают с красителем от 30 мин до 24 ч. Хорошие результаты можно получить и без погружения стекла в воду.

Окрашенные препараты исследуют под микроскопом с иммерсионной системой объектива. При микроскопировании отмечают характер микрофлоры, плотность обрастания и доминирующие формы. Отдельные ассоциации можно запечатлеть, используя микрофотосъемку. Таким образом, получают информацию о естественной локализации колоний разных видов микроорганизмов в почве, об их размерах, о плотности обсеменения почвы микроорганизмами. Стекло после пребывания в почве служит иллюстрацией микробного пейзажа данной почвы.