Определение содержания белковых веществ в растениях

Реактивы. 1. 6-процентный раствор сульфата меди. 2. 1,25-процентный раствор едкого натра. 3. 10-процентный раствор хлорида бария. 4. Серная кис лота химически чистая (плотность 1,84). 5. 0,1 н. раствор гидроксида натрия. 6. 0,1 н. раствор серной кислоты (титрованный).

Белковые вещества осаждают основной солью сульфата меди CuS0₄ • Cu(OH)₂ при нагревании. Осадок белка отмывают от солей и растворимых азотистых веществ и обугливают концентрированной серной кислотой; аммиачный азот отгоняют на аппарате Кьельдаля и титруют.

Ход анализа. 1. 1 г воздушносухого или 5 г свежего материала отвесьте на аналитических весах, поместите в химический стакан емкостью 150—200 мл.

2. Добавьте туда же 50 мл дистиллированной воды и содержимое стакана нагрейте до кипения.

3. В горячий раствор добавьте сначала 25 мл 6-процентного раствора сульфата меди и после этого при помешивании приливайте небольшими порциями 25 мл 1,25-процентного раствора едкого натра. Образующаяся при этом основная соль сульфата меди CuSО₄ ∙ Cu(OH)₂ осаждает белок в виде комплекса белковых молекул и меди.

4. Осадку дайте отстояться в течение часа.

5. Затем в колбу емкостью 300 мл вставьте воронку с фильтром и содержимое стакана профильтруйте (сначала сливайте по стеклянной палочке жидкость над осадком).

6. Осадок в стакане несколько раз промойте декантацией горячей водой, сливая промывные воды на фильтр.

7. Закончив промывание осадка, перенесите его без потерь на фильтр и здесь снова промойте до исчезновения реакции в фильтрате на сульфат-ион (с хлоридом бария ВаСl₂) или ион меди (с желтой кровяной солью К₄[Fe(CN)₆].

8. Воронку вместе с фильтром и осадком подсушите в сушильном шкафу при 50—60°С в течение 2 ч.

9. После этого осадок вместе с фильтром перенесите в колбу Кьельдаля емкостью 500 мл.

10. Прилейте туда же 10—15 мл концентрированной серной кислоты (для сжигания осадка с фильтром).

11. После этого отгоните аммиак.

Количество азота определите по формуле:

где х — содержание азота в процентах на воздушносухое вещество; m — навеска исследуемого вещества в граммах; m₁ — количество миллилитров 0,1 н. раствора серной кислоты, взятой в приемник; T₁ — поправка к титру этой кислоты; m₂ — количество миллилитров 0,1 н. раствора щелочи, израсходованной на титрование остатка серной кислоты в приемнике; Т₂ — поправка к титру щелочи; 0,1 — нормальность титрованного раствора серной кислоты; 0,014 — количество граммов азота, составляющее 1 мг-экв его.

Содержание белка вычислите так: умножьте рассчитанное количество- азота на соответствующий каждой группе культур коэффициент. При анализе семян кукурузы, гречихи, фасоли — на 6,00; при анализе зерна пшеницы, овса, ржи, ячменя, гороха, бобов - на 5,70 и при анализе семян подсолнечника, льна, хлопчатника, земляного ореха, клещевины, люпина — на 5,50 (величина коэффициента зависит от содержания азота в белках этих культур).