Исследование состава и свойств слюны

Цель работы:исследовать состав слюны, количественно определить содержание в ней хлоридов.

Слюна́ (лат. saliva) – прозрачная бесцветная жидкость, жидкая биологическая среда организма, выделяемая в полость рта тремя парами крупных слюнных желёз (подчелюстные, околоушные, подъязычные) и множеством мелких слюнных желёз полости рта. В полости рта образуется смешанная слюна или ротовая жидкость, состав которой отличается от состава смеси секретов желёз, так как в ротовой жидкости присутствуют микроорганизмы и продукты их жизнедеятельности и различные компоненты пищи, компоненты зубного налёта и зубного камня.

В норме рН слюны – 6,4-7,3, но при большой скорости слюноотделения достигает 7,8 pH. Кислотность слюны околоушных желёз pH = 5,81, подчелюстных – рН = 6,39. У детей в среднем кислотность смешанной слюны рН = 7,32, у взрослых – рН = 6,40. Кислотно-щелочное равновесие слюны в свою очередь определяется аналогичным равновесием в крови, которая питает слюнные железы. Идеальный уровень pH для ротовой полости – выше 7. Чем выше кислотность, тем более благоприятная среда для развития микроорганизмов. Кислая среда возникает, например, после употребления богатой углеводами пищи.

На 98,5 % и более слюна состоит из воды, содержит соли различных кислот, микроэлементы и катионы некоторых щелочных металлов, муцин (формирует и склеивает пищевой комок), лизоцим (бактерицидный агент), ферменты амилазу и мальтазу, расщепляющие углеводы до олиго- и моносахаридов, а также другие ферменты, некоторые витамины. Также состав секрета слюнных желёз меняется в зависимости от характера раздражителя (https://ru.wikipedia.org).

Органические компоненты:

- белки – 1,4-6,4 г/л;

- муцин – 0,9-6,0 г/л;

- холестерин – 0,02-0,50 г/л;

- глюкоза – 0,1-0,3 г/л;

- мочевая кислота – 0,005-0,030 г/л;

- мочевина – 140-750 ммоль/л.

Неорганические компоненты:

- вода – 994 /л;

- аммоний – 0,01-0,12 г/л;

- соли натрия – 6-23 ммоль/л;

- соли калия – 14-41 ммоль/л;

- соли кальция – 1,2-2,7 ммоль/л;

- соли магния – 0,1-0,5 ммоль/л;

- хлориды – 5-31 ммоль/л;

- гидрокарбоната – 2-13 ммоль/л.

Оборудование: резиновая пробка №14,5 со стеклянной трубкой, изогнутой под прямым углом, пипетки для отбора проб веществ, ложечка для насыпания твёрдых веществ, держатели для пробирок, ножницы, универсальная индикаторная бумага, коническая колба на 100 мл, чашка Петри, стеклянная воронка (для заполнения бюретки), бюретка на 25 мл, пластиковый одноразовый стакан (для слюны), вата, красная лакмусовая бумага.

Реактивы: раствор разбавленной слюны, 0,5% раствор крахмала, концентрированная уксусная кислота, концентрированная серная кислота, 5% раствор сульфата меди, 20% раствор нитрита натрия, насыщенный раствор хлорида натрия, 10% раствор гидроксида натрия, раствор Люголя (I₂ в KI), фелингова жидкость, раствор тимола, 0,1 н. раствор нитрата серебра, 5% раствор хромата калия (K₂CrO₄), хлороформ, смесь концентри­рованной серной кислоты с формалином (50:1), 1% раствор нитрата серебра, 10% раствор азотной кислоты, баритовая вода.

Ход работы.1. Приготовление раствора слюны.

Хорошо прополощите рот от твёрдых остатков пищи. Наберите в рот дистиллированной воды. Прополощите ротовую полость в течение 1-2 мин. Слюну профильтруйте через слой рыхлый слой ваты.

2. Исследование состава и свойств слюны.

Качественное исследование.1. Определение рН слюны.

При помощи универсальной индикаторной бумаги определите рН слюны. Сравните с нормой. Сделайте вывод.

2. Обнаружение мочевой кислоты и белков.

К 1 мл слюны добавьте 0,5 ложечки кристаллического хлорида натрия, перемешайте содержимое пробирке и дайте постоять 0,5 мин. для оседания на дно пробирки нерастворившегося хлорида натрия. Наблюдается выпадение осадка (помутнение) натриевой соли мочевой кислоты и белков (муцин, амилаза).

3. Определение белков.

Исследуйте слюну на содержание в ней белков (биуретовая реакция: 0,5 мл 5% раствора сульфата меди (II) + 1 мл 10% раствора гидроксида натрия + слюна).

4. Обнаружение α-амилазы.

Используя крахмал и йод, определите содержание амилазы в слюне (2 мл слюны + 0,5 мл крахмала + раствор йода). Через 10-15 мин. окраска раствора с синей меняется на красно-бурую и оранжевую из-за гидролитического распада крахмала.

5. Обнаружение муцина.

В слюне содержится сложный белок – муцин, который вырабатывается слизистыми и смешанными слюнными железами,

Для определения наличия муцина возьмите в пробирку 1-2 мл нефильтрованной слюны и добавьте к ней 0,5 мл воды, а затем – 5-10 капель ледяной уксусной кислоты. Встряхните пробирку. В пробирке выпадет осадок белка муцина. Слюна теряет свой слизистый характер.

6. Обнаружение углеводов.

Определяют реакцией Молиша.

К 0,5 мл слюны прибавляют 2-3 капли 1%-ного спиртового раствора тимола и по стенке пробирки (осторожно) – 20 капель концентрированной серной кислоты. При встряхивании на дне пробирки образуется красное окрашивание.

7. Обнаружение холестерина.

1 способ. К 1 мл слюны прилить 1 мл хлороформа. В пробирку добавить, наслаивая по стенке (пробирку держать почти горизонтально, не встряхивать!), 1 мл концентрированной серной кислоты. Пробирку легко встряхивают. Сначала верхний слой, а затем вся жидкость, принимает красную, оранжевую или красно-фиолетовую окраску.

2 способ. Реакция Витби. К 0,5 мл слюны прилить 1 мл хлороформа. В пробирку добавить 20 капель смеси концентрированной серной кислоты с формалином (50:1) и встряхивают. Хлороформный слой окрашивается в яркий вишнёво-красный цвет, а кислотный – в тусклый ярко-коричневый с зелёной флуоресценцией.

8. Обнаружение ионов аммония. В пробирку наливают 2-3 мл слюны и 1-2 мл насыщенного раствора Са(ОН)₂ (известковая вода), перемешивают и подносят к отверстию пробирки, не прикасаясь к её стенкам, лакмусовую бумагу, смоченную водой. Через некоторое время бумага приобретает синий цвет, за счет поглощения выделяющегося аммиака:

(NН₄)₂SО₄ + Са(ОН)₂ → СаSО₄ + 2Н₂О + 2NН₃↑

Обнаружение ионов хлора. К 1 мл исследуемого раствору добавьте 4-5 капель 1% раствора нитрата серебра и 5-6 капель 10% раствора азотной кислоты. Выпадает осадок хлорида серебра. Напишите уравнение реакции.