Методы исследования микрофлоры.

1. Бактериоскопический методимеет самостоятельное значение для биотопов, в которых обитает большое количество различных микроорганизмов: полость рта, кишечник, вагина. Мазок окрашивают по Граму и изучают морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов.

Метод дает общее представление о численности микроорганизмов, позволяет получить общее представление о составе микрофлоры (преобладание Грам+ или Грам- бактерий определенной формы, наличие грибов), а также выявить микроорганизмы, которые не культивируются на питательных средах.

2.Бактериологический метод используется для биотопов с широким спектром микроорганизмов, выполняется с учетом данных бактериоскопии.

Основные принципы бактериологического метода при исследовании микрофлоры:

– материал лучше исследовать сразу, при невозможности немедленного исследования материал доставляют в лабораторию в пробирке с консервантом в течение 2 часов, так как при более длительном хранении значительно нарушаются взаимоотношения между видами;

– первичный посев материала проводят без предварительного обогащения, так как обогащение нарушает количественные соотношения видов;

– используют большой набор питательных сред, различные условия культивирования (аэробные, анаэробные, атмосфера СО₂);

– в клиническом образце определяют соотношение анаэробов и аэробов, качественный (видовой) и количественный(соотношение разных видов) состав микроорганизмов в микроорганизмиоценозе конкретного биотопа.

Качественное обнаружение даже единичных особей патогенных микроорганизмов свидетельствует о крайнем неблагополучии в биотопе.

Для количественного подсчета УПМ в исследуемом материале готовят ряд разведений материала (10^-2, 10^-4, 10^-6) и производят количественный посев этих разведений на сектора чашек с различными питательными средами. Для выделения энтеробактерий используют среду Левина, для выделения энтерококков — желчно-кровяной агар, для синегнойной палочки — фурагиновый агар, для грибов — среду Сабуро. Микроорганизмов идентифицируют общепринятым способом: УП бактерийобычно идентифицируют до вида, грибы — до рода.

Количество бактерий определяют по формуле:

КОЕ/мл (г) = количество колоний на определенном секторе х фактор разведения х 20,

где 20 — индекс пересчета на 1 мл при посеве 1 капли (0,05 мл) разведения материала.

– определяют наличие факторов патогенности у выделенных штаммов (гемолизинов, плазмокоагулазы, капсулы).

– через 5–7 дней целесообразно провести повторное микроорганизмиологическое исследование на дисбиоз.

Микробиологическое заключение базируется на сравнении полученных результатов с установленной нормой для данного биотопа с учетом возраста обследуемого.

Литература

1. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / под ред. А. А. Воробьева, А. С. Быкова. М. : Медицинское информационное агентство, 2003. 236 с.

2. Гранитов В. М. Хламидиозы / В. М. Гранитов. М.: Медицинская книга, 2000. 192 с.

3. Корнев, И. И. Стерилизация изделий медицинского назначения : справочное руководство / И. И. Корнев. СПб. : Человек, 2003. 156 c.

4. Коротяев, А. И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология/ А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. СПб. : Специальная литература, 2002. 591 с.

5. Красильников, А. П. Справочник по антисептике / А.П. Красильников. Мн.: Высшая школа, 1995. 367 с.

6. Лобзин, Ю. В. Практика лабораторных исседований при инфекционных заболеваниях / Ю. В. Лобзин,Ю. П. Финогеев, В. Ф. Крумгольц. СПб. : Элби-СПб, 2005. 274 с.

7. Маянский, А. Н. Микробиология для врачей /А. Н. Маянский. Нижний Новгород : НГМА, 1999. 393 с.

8. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология / под ред. А. А. Воробьева, 2-е изд., испр. и доп. М. : ООО «Медицинское информационное агентство», 2006. 704 с.

9. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований/ под ред. А. С. Лабинской, Л. П. Блинковой, А. С. Ещиной. М. : Медицина, 2004. 576 с.

10. Поздеев, О. К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В. И. Покровского. М. : ГЭОТАР-Мед., 2001. 768 с.

11. Страчунский, Л. С. Современная антимикробная химиотерапия : руководство для врачей / Л. С. Страчунский, С. Н. Козлов. М.: Боргес, 2002. 436 с.

12. Урсова, Н. И. Современные методы коррекции дисбиоза кишечника у детей : учебное пособие / Н. И. Урсова, Г. В. Рымарчук, Л. А. Щеплягина, К. И.Савицкая. М.: Моники, 2000. 48 с.

13. Brooks, G. F. Medical Microbiology / G. F. Brooks, J. S. Butel, S. A. Morse. 24^th ed. NY: McGraw-Hill, 2007. 832 p.

14. Harley, J. P. Laboratory Exercises in Microbiology / J. P. Harley, L. M. Prescott. 5^th ed. The McGraw-Hill Companies, 2002. 860 p.

15. Kayser, F.H. Medical Microbiology / F. H. Kayser. Thieme, 2005. 466 p.

16. Manual of Clinical Microbiology / еd. P. Murray. 8^th ed. Washington DC: Americanh Society of Microbiology, 2003. 2322 p.

17. Talaro K. P. Founndation in Microbiology / K. P. Talaro. 4^th ed. The McGraw-Hill Companies, 2002. 698 p., Arthur Talaro.

18. http://bacterio.cict.tr — сайт общества систематической бактериологии.

19. http://www.asm.org/search — сайт американского общества микробиологов (ASM).