Метод Виртца в модификации Саватеева
К насыщенному водному раствору (около 5%) малахитовой зелени добавляют 5% глицерина, пропитывают смесью полоски фильтровальной бумаги и высушивают их (лучше при 50°С). Затем готовят 0,5% водный раствор сафранина, которым смачивают другие полоски фильтровальной бумаги, и высушивают. Сохраняют окрашенные бумажки в закрытых банках в защищенном от солнечного света месте.
Техника окраски. На фиксированный над пламенем мазок наносят 2—3 капли дистиллированной воды и накладывают полоску бумаги, окрашенной малахитовой зеленью. Препарат нагревают над пламенем до появления паров (3—4 раза), приблизительно в течение минуты. При испарении добавляется вода. После остывания препарата смывают краску с бумажкой струей водопроводной воды (30 секунд), и тотчас же на мокрую поверхность препарата кладут бумажку, окрашенную сафранином. Если необходимо, добавляют несколько капель воды. Через 30—40 секунд мазок промывают водой, высушивают и микроскопируют.
Микроскопическая картина: свободно лежащие споры — зеленовато-голубого цвета, споры внутри микробных клеток — темно-зеленые, вегетативные формы микробов — красные.
Для окраски лучше брать малахитовую зелень в виде двойной соли ZnCl2 (медно-желтые кристаллы), хуже — щавелевокислая соль (фиолетово-зеленые или ярко-зеленые кристаллы с бронзовым блеском).
Модификация Шеффер и Фултона.
- На фиксированный в пламени мазок наливают насыщенный (5%) водный раствор малахитовой зелени на 30—60 секунд с подогреванием до появления паров (3—4 раза).
- Краску смывают текущей водой 30—40 секунд.
- Наливают 0,5% водный раствор сафранина приблизительно на 30 секунд.
- Промывают водой, высушивают через фильтровальную бумагу.
Микроскопическая картина: споры — зеленые, вегетативные формы —красные.
Способ Пешкова
Наиболее простой и демонстративный; он не требует химических протрав и дифференцировки.
Приготовленный мазок:
- фиксируют на пламени горелки или смесью спирта и формалина,
- окрашивают кипящей леффлеровской метиленовой синькой (над пламенем горелки) в течение 15—20 секунд,
- смывают водой,
- докрашивают 0,5% водным раствором нейтральрота в течение 30 секунд,
- промывают водой и высушивают.
Микроскопическая картина: споры — голубого или синего цвета, молодые споры — черно-синие, цитоплазма вегетативных форм — розовая, хроматиновые элементы протоплазмы окрашиваются в фиолетовый цвет.
Способ Мюллера
- Приготовленный на предметном стекле мазок из исследуемой культуры фиксируют на пламени.
- На мазок наливают 5% водный раствор хромовой кислоты на 1—3 минуты.
- Промывают препарат водой и слегка просушивают.
- Через полоску чистой фильтровальной бумаги красят карболовым раствором фуксина при нагревании (до появления паров) в течение 3—4 минут.
- Обесцвечивают 5% водным раствором серной кислоты в течение 5 секунд.
- Промывают водой.
- Окрашивают дополнительно леффлеровской синькой 1—2 минуты.
- Промывают водой и высушивают через фильтровальную бумагу.
Микроскопическая картина: споры — красные, вегетативные формы — синие.
Способ Ауески
На приготовленный, высушенный на воздухе (нефиксированный) мазок наливают 1—2% водный раствор соляной кислоты и подогревают на пламени до появления паров (3—4 раза). Затем препарат промывают водой, высушивают через фильтровальную бумагу, фиксируют на пламени и окрашивают карболовым раствором фуксина при нагревании (до появления паров) в течение 3—5 минут. Потом препарат обесцвечивают 5% водным раствором серной кислоты в течение нескольких секунд (до бледно-розовой окраски), промывают водой и дополнительно окрашивают леффлеровской метиленовой синькой или 1% водным раствором малахитовой зелени в течение 2 минут. Краску смывают водой, мазок высушивают.
Микроскопическая картина; споры — красные, вегетативные формы — синие (или зеленые).
Способ Клейна
- готовят в пробирке густую эмульсию путем смыва исследуемой культуры физиологическим раствором,
- к эмульсии прибавляют равное количество карболового раствора фуксина,
- пробирку со смесью нагревают на пламени (до появления паров) в течение 5 минут,
- из прогретой смеси приготовляют мазок, высушивают его и фиксируют,
- обесцвечивают 1% водным раствором серной кислоты в течение 5—10 секунд,
- промывают водой,
- слегка подсушивают,
- окрашивают леффлеровской синькой в течение 1—3 минут,
- смывают водой и мазок обсушивают.
Микроскопическая картина: споры — красные, вегетативные формы — синие. Недостаток способа — значительный расход краски (фуксина).
Окраска жгутиков
Х
Рис. 3. Жгутики
бактерий
отя Кох разработал способ окраски жгутиков более чем сто лет назад, существующие в настоящее время методики не отличаются легкостью и надежностью. Поскольку толщина бактериальных жгутиков лежит за пределами разрешения светового микроскопа (жгутики имеют диаметр около 10—30 нм), для того чтобы их увидеть, необходимо, так сказать, «вымазать их дегтем и обвалять в перьях». Неподвижные бактерии лишены жгутиков, однако известны организмы, жгутики которых «парализованы». Для обнаружения жгутиков у микробных клеток специальные прописи предусматривают применение протрав, которые способствуют осаждению на жгутиках препаратов железа или серебра —происходит искусственное наращивание поперечника жгутиков, и они лучше видны под микроскопом. При окраске на жгутики, ввиду их хрупкости, необходимо соблюдать специальные предосторожности, касающиеся как самой культуры и способа изготовления мазка, так и подготовки стекол. Культура, предназначенная для окраски на жгутики, должна быть свежей, не старше 12—20 часов роста при соответствующей температуре на твердой среде (преимущественно агаровой). Материал берут самым легким прикосновением петли к среде. Затем петлю с материалом вводят в пробирку с 2—3 мл стерильной (лучше водопроводной) воды и, держа петлю неподвижно 1—2 минуты или осторожно погружая ее 3—4 раза в воду, дают самим микробам постепенно распределиться в воде. Через 15—20 минут, когда микробы равномерно распределятся в среде, платиновой петлей осторожно берут материал и наносят на подготовленное стекло. Нанесенную каплю не размазывают по стеклу, а, дав ей подсохнуть, фиксируют на пламени или одним из химических способов фиксации. Предметные или покровные стекла для изготовления препаратов на жгутики должны быть абсолютно чистыми. Обычно стекла для этой цели обрабатывают по способу Цетнова. Дальнейшие подробности о технике окраски на жгутики даны при описании отдельных способов.
Дата добавления: 2020-11-18; просмотров: 536;