Модификация способа Ольта.

После окраски сафранином (по оригиналь­ной прописи) мазок докрашивают 1% водным раствором метиленовой синьки в течение 2 минут. Быстро смывают водой, высушивают.

Микроскопическая картина: палочки — синие, капсулы — розовые.

Способ Ребигера

Этот простой и демонстративный способ окраски со­стоит в том, что препарат фиксируют не пламенем, а формалином, причем фиксация происходит одновременно с окраской. Для этой цели готовят сле­дующий раствор: 15—20 г генцианвиолета растворяют в 100 мл 40% формалина, дают раствору постоять несколько часов. Затем этот насыщенный при комнатной температуре раствор фильтруют, после чего он готов к употреблению. Окрашивают нефиксированный мазок указанным выше раствором в течение 15—20 секунд, быстро промывают водой и высушивают.

Микроскопическая картина: капсулы — красновато-фио­летовые, бактерии — темно-фиолетовые.

С успехом можно окрашивать капсулы краской Романовского-Гимза. На фиксированный мазок наносят раствор краски (2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды) на 15—20 минут. Краску быстро смывают водой и мазок высушивают фильтровальной бумагой.

Микроскопическая картина: капсулы — бледно-розового цвета, бактерии — синие.

Способ Гусельниковой

Для выявления капсульных микробов в культурах предлагается следующий способ: каплю 3—4% водного раствора конгорот нанести на абсолютно обезжиренное предметное стекло, добавить к ней одну каплю исследуемой культуры, тщательно размешать и оставить на 5—7 минут; затем каплю размазать по стеклу, как при изготовлении мазка крови, высу­шить на воздухе и микроскопировать с иммерсионной системой.

Микроскопическая картина: фон — красно-розовый, капсулы —бесцветные, микроорганизмы — розовые.

Способ Кауфмана

Мазок окрашивают леффлеровской метиленовой синькой в течение 2—3 минут. Краску смывают водой и мазок погружают в 0,5% раствор азотнокислого серебра или в 0,25% водный раствор протаргола на 3—4 минуты, затем окрашивают карболовым раствором фуксина, разведенным в 20 раз, в течение 5—10 секунд, промывают в воде и высушивают.

Микроскопическая картина: капсулы — темно-красные, бактерии —темно-синие.

Способ Ионе

Фиксированный мазок окрашивают 2% водным раствором метилвиолета (или генцианвиолета) в течение 1—2 минут при подогревании. Краску быстро смывают небольшим количеством воды, мазок обрабатывают 2% водным раствором уксусной кислоты в течение 10 секунд, промывают в воде и высушивают.

Микроскопическая картина: капсулы — розовато-фиоле­товые, бактерии — темно-фиолетовые.

Окраска спор

При исследовании живых неокрашенных препаратов, изготовленных из старых, главным образом, агаровых культур, споры чаще всего обнаружи­ваются в виде овальных или круглых образований, резко преломляющих свет. Зрелые споры обычными растворами красок не окрашиваются. В микробной клетке споры располагаются или в центре ее (экваториально), или на конце (терминально), или ближе к концу палочки (субтерминально). Споры имеют очень плотную оболочку, состоящую из наружного и внутреннего слоев. Все специальные методы окраски спор основаны на действии различных протрав, изменяющих структуру оболочки и тем облегчающих проникновение в споры красящего вещества. После протравливания препараты окраши­вают обычно карболовыми растворами красок с подогреванием мазка, после­дующим обесцвечиванием и дополнительной окраской.

Неокрашенные споры живых бактерий имеют при наблюдении в обычный микроскоп черное обрамле­ние и ярко светятся в плоскости, находящейся немного выше положения истинного фокуса. Не следует считать, однако, что любая сильно преломляющая свет структура внутри бактерии — это эндоспора, особенно если отсут­ствует информация о теплоустойчивости.

Прямой тест на присутствие эндоспор возможен благо­даря явлению, которое наблюдается во многих эндоспорах после погружения в окислитель в кислой среде (например, 0,1% KМnO₄ в 0,3н НNО₃ или 0,3н НСl). При этом оболочка споры теряет целост­ность, а часть ее протоплазмы, теперь легко окрашивае­мая основными красителями, выпячивается наружу че­рез образовавшуюся брешь. Из-за поразительной скоротечности происходящего события (менее 20 минут пребы­вания в растворе окислителя) этот тест заслуживает названия «проверки на лопанье» (popping test). Его удобно проводить, помещая высушенную на покровном стекле пленку спор на 10—20 минут в раствор окислителя; «лопнувшие» споры видны без окраски, хотя последняя делает их более легко различимыми.

Имеется несколько удовлетворительных методов для окрашивания эндоспор в бактериях. При использовании простейшего из них — негативного окрашивания— по­лучают нефиксированные препараты, материал которых имеет негативный вид. Для осуществления метода взя­тый петлей 7% (вес/объем) водный нигрозин сме­шивают на покровном стекле с набранной петлей куль­турой, смесь распределяют в виде тонкой пленки и вы­сушивают на воздухе. Покровное стекло переворачива­ют пленкой вниз, помещают на предметное стекло и закрепляют в нескольких местах свечным воском. Эндо­споры выглядят, как сильно преломляющие свет сфери­ческие или эллипсоидальные образования, находящиеся как внутри, так и за пределами клеток бактерий.

Эндоспоры очень устойчивы к простому окрашива­нию, но, будучи однажды окрашенными, они довольно устойчивы и к обесцвечиванию.

Полезным методом пози­тивного окрашивания бактериальных эндоспор является метод Дорнера.