Окрашивание полифосфата
Включения, состоящие из неразветвленных структур с элементным составом Мn+2РnО3n+1, выявляют следующим образом.
- Мазок на предметном стекле фиксируют нагреванием.
- Окрашивают его в течение 10—30 с в растворе метиленового синего по Леффлеру или в 1%-ном (вес/объем) толуидиновом синем.
- Отмывают краситель водопроводной водой, подсушивают и смотрят в микроскоп.
При окраске метиленовым синим гранулы полифосфата выглядят шариками, имеющими цвет от синего до фиолетового, а вся остальная цитоплазма окрашивается в светло-голубой цвет. Толуидиновый синий окрашивает метахроматически, и гранулы имеют красный цвет на фоне голубой цитоплазмы.
Окрашивание полисахаридов с использованием реактива Шиффа
Этим методом выявляют гликогеноподобные вещества.
- Мазок суспензии на предметном стекле фиксируют нагреванием.
- На 5 минут на стекло наносят раствор перйодата [20 мл 4%-ной (вес/объем) йодной кислоты в воде, 10 мл 0,2М водного ацетата натрия и 70 мл 95%-ного этанола; защищать раствор от света!].
- Отмывают стекло 70%-ным (объем/объем) этанолом.
- На 5 минут наносят на предметное стекло восстанавливающий раствор, содержащий 300 мл этанола, 5 мл 2Н соляной кислоты, 10 г йодистого калия, 5 г тиосульфата натрия (пятиводного), 200 мл дистиллированной воды. Восстанавливающий раствор готовят следующим образом: к раствору йодистого калия и тиосульфата натрия в дистиллированной воде сначала приливают этанол, а затем соляную кислоту. Смесь перемешивают и оставляют на некоторое время для выпадения в осадок серы, после чего собирают надосадочную жидкость.
- Отмывают стекло 70%-ным (вес/объем) этанолом.
- Окрашивают препарат реактивом Шиффа в течение 15—45 минут (точное время следует определить экспериментально). Реактив Шиффа готовят следующим образом: 2 г основного фуксина растворяют в 400 мл кипящей дистиллированной воды, охлаждают до 50°С и фильтруют через фильтровальную бумагу. Добавляют к фильтрату 10 мл 2Н соляной кислоты и 4 г метабисульфита калия. Сосуд плотно закупоривают и оставляют на 12 ч в холодном темном месте. Добавляют такое количество 2Н соляной кислоты (10мл), чтобы при высыхании на предметном стекле реактив не давал розового налета. Реактив Шиффа хранят в темноте.
- Несколько раз отмывают стекло раствором, состоящим из 2 г метабисульфита калия и 5 мл концентрированной соляной кислоты в 500 мл дистиллированной воды.
- Отмывают препарат водопроводной водой и дополнительно окрашивают 0,002%-ным (вес/объем) водным раствором малахитового зеленого в течение 2—5 с.
- Отмывают препарат водопроводной водой, подсушивают и смотрят в микроскоп.
Полисахариды окрашиваются в красный цвет, все остальные компоненты цитоплазмы — в зеленый.
Дата добавления: 2020-11-18; просмотров: 437;