Материалы и оборудование
1) реактивы:
Раствор 1: растворить в воде и довести до 500 мл NaNО3 - 10,0 г, К2НРО4 - 2,4г, КН2РО4 - 1,2 г и дрожжевого экстракта -1,0 г.
Раствор 2: растворить в воде и довести до 500 мл NaNО3 - 10,0 г, К2НРО4 - 2,4г, КН2РО4 - 1,2 г.
Раствор 3 (раствор глюкозы): растворить в воде и довести до 500мл 40,0 г глюкозы (С6Н12О6*H20).
Раствор 4: растворить в воде и довести до 1000 мл MgSО4 *7Н2О – 4,0 г; цитрата железа (Ш) – 0,01 г.
Плотная питательная среда для поддержания культуры (скошенный агар): растворить 18 г агар-агара в воде при нагревании, добавить 50 мл раствора 1, 125 мл раствора 3, 100 мл раствора 4 и довести до 1000 мл водой. Разлить по пробиркам по 6 мл, закрыть ватными пробками и стерилизовать в автоклаве. После автоклавирования остудить в наклонном положении для приготовления скошенного агара.
Стерильная вода.
Растворы 1,2,4, скошенный агар и воду автоклавировать при 1,0 атм. 30 мин, раствор 3 при 0,5 атм. 30 мин. Хранить не более 2 недель при температуре 2-40С.
2) оборудование: колбы на 250 мл с ватными пробками стерильные, пипетки на 1,5 и 10 мл стерильные, цилиндры на 100 мл стерильные. Посуда стерилизуется 1 час при 1800С или 2 часа при 1600С в сухожаровом шкафу.
РАБОТА 9. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ МИКРОБНОЙ БИОМАССЫ В ПОЧВЕ
Метод основан на определении различия в количестве растворимого органического углерода в почвенных образцах, подвергнутых фумигации и не фумигированных образцах. При фумигировании почвенных образцов живые клетки микроорганизмов погибают и минерализуются, увеличивая тем самым содержание растворимого органического углерода. Органический углерод экстрагируют раствором сульфата калия и определяют при окислении бихроматом калия.
Ход работы
1) Фумигация образцов
Взвесить 150-200г влажной почвы в четыре стеклянных стаканчика.
Два стаканчика поместить в десикатор. Туда же поместить стеклянный стаканчик с 50 мл безэтанолъного хлороформа и гранулами против сильного кипения. Удалить из десикатора воздух с помощью масляного насоса до того момента, пока хлороформ не закипит, и перекрыть кран десикатора. Через 24 часа фумигации при комнатной температуре в темноте удалить хлороформ из десикатора и вынуть образцы. С двумя остальными образцами осуществляют ту же процедуру, но без хлороформа.
2) Получение почвенного экстракта
Смешать 1 часть фумигированного (или не фумигированного) образца с 5 частями раствора сульфата калия, перемешать на ротаторе 30 мин. и отфильтровать (каждый образец в трех повторностях). В полученном почвенном экстракте определить содержание органического углерода.
3) Определение органического углерода в почвенном экстракте
В круглодонной колбе смешать 5-20 мл почвенного экстракта с 10 мл раствора бихромата калия и с 10 мл серной кислоты. Закрыть колбу воронкой и кипятить 30 мин. при температуре 1500С. Охладить колбу до комнатной температуры. Добавить 100 мл дистиллированной воды, 1-2 капли раствора индикатора и титровать раствором соли Мора до перехода окраски от сине-фиолетового до изумрудно-зеленого. Аналогичную процедуру проводят с контролем на реагенты (вместо почвенного экстракта добавляется чистый раствор сульфата калия).
4) Расчет содержания растворимого органического углерода
Расчет содержания растворимого органического углерода осуществляют по формуле:
Сорг, мг/г = ((КР – Ф или НФ)*0,3*V*100) / (мл*а*%св), где
КР - средний объем соли Мора, затраченный на титрование контроля
на реактивы, мл;
Ф - средний объем соли Мора, затраченный на титрование
фумигированного образца, мл;
НФ - средний объем соли Мора, затраченный на титрование
нефумигированного образца, мл;
0,3 - пересчетный коэффициент (1 мл 0,1 М (NН4)2FeSО4.6H20
соответствует 0,3 мг С);
V - объем полученного почвенного экстракт, мл;
мл - аликвота почвенного экстракта, взятого для анализа;
а - исходный вес почвы, взятый для получения экстракта, г;
100 (%св)-l- фактор для пересчета на сухое вещество почвы.
5) Расчет количества углерода микробной биомассы
Расчет количества углерода микробной биомассы производят по формуле:
Смикр, мг С/г = (Соргфум – Соргнефум) / 0,35, где
Соргфум - среднее значение количества растворимого углерода в
фумигированном образце, мг/г;
Соргнефум - среднее значение количества растворимого углерода в
нефумигированном образце, мг/г;
0,35 - пересчетный коэффициент (от количества органического
углерода к количеству углерода микробной биомассы).
Дата добавления: 2020-10-01; просмотров: 362;