Обнаружение капсул по методу Бурри-Гинса

1. Смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши и при помощи стекла со шлифовальным краем сделать мазок таким же образом, как мазок из крови, высушить и фиксировать.

2. На мазок нанести водный раствор фуксина на 1-2 мн.

3. Промыть водой, высушить на воздухе и микроскопировать. Бактерии окрашиваются в красный цвет, а неокрашенные капсулы контрастно выделяются на черно- розовом фоне

2)биологический метод. Заражение наиболее чувствительных животных, например, для диагностики сибирской язвы заражают морских свинок, белых мышей или кроликов. После гибели животных, делают вскрытие, готовят мазки-отпечатки из органов. Неокрашенная капсула окружает грамположительных, крупных палочек или стрептобацилл;

3)меченные серологические реакции (РИФ, ИФА и РИА). Например, для выявления капсульных палочек B.anthracis в экссудате, мазок из экссудата обрабатывают капсульной сибиреязвенной антисывороткой и меченной антииммуноглобулиновой сывороткой. Учет реакции проводится по свечению иммунного комплекса (АГ-АТ-меченное АТ) при люменесцетной микроскопии.

Антигенов-ингибиторов фагоцитоза определяют иммунологическим методом с применением моноклониальных антител против конкретных антигенов бактерий (ИФА, РИФ). Например, принципиальная схема ИФА для выявления А-белка S.aureus в клиническом материале (гной, мокрота и др.) следующая. Моноклональные антитела против А-белка S.aureus фиксируется на твердой фазе. К нему добавляют исследуемый материал с предполагаемом антигеном (А-белок). После инкубации и промывки на фиксированных антителах остаются специфические к ним антигены, если таковые имелись в исследуемом материале. Для обнаружения комплекса АГ-АТ к нему добавляют антииммуноглобулиновую сыворотку (антитела против антител), меченную ферментом (пероксидазой). После второй инкубации и промывки образовавшийся комплекс (АГ-АТ-меченное АТ) можно обнаружить, добавив субстрат к ферменту. Индикатором реакции является способность ферментов давать цветные реакции при взаимодействии с соответствующими субстратами. Учет реакции проводится определением степени мутности реакции на ИФА-анализаторе (спектрофотометре).

Методы идентификации бактерий по токсигенности (по способности синтезировать экзотоксин).

1. Биологический метод. Испытуемые культуры или токсины в определенных дозах вводят лабораторным животным с последующей регистрацией их гибели и расчетом летальных доз.

2. Иммунологические методы с применением стандартных антитоксических антител: реакция нейтрализации токсина, ИФА, РИА и РИФ;

РН токсина антитоксической сывороткой на животных основан на способности специфических антител – антитоксинов подавлять биологическую активность бактериальных экзотоксинов.

Компоненты:

1) исследуемый материал (экзотоксин С.рerfringens);

2) диагностические сыворотки с антитоксинами против С.рerfringens,C. novyi, C. septicum, C. histolyticum и др.;

3) мыши – индикатор реакции.

Диагностические сыворотки получают путем гипериммунизации кроликов анатоксинами - инактивированными эзотоксинами (формальдегидом), но сохранившими свои иммуногенные свойства, то есть способность индуцировать выроботку антител.

Принцип метода. К диагностическим видоспецифическим антитоксическим сывороткам добавляют исследуемого токсина, выдерживают в течение определенного времени и вводят внутрикожно животным. Учет реакции проводится по живой мышке.