Методы выделения, культивирования и идентификации вирусов

Цель занятия: изучить принципы и методы выделения, культивирования и идентификации вирусов.

Материалы и оборудование: 1) световой микроскоп; 2) препараты для микроскопии (или фотографии препаратов) культур клеток неинфицированных вирусами и инфицированных вирусами: а) с крупноклеточной дегенерацией клеток, б) с мелкоклеточной дегенерацией клеток, в) с образованием симпластов, г) с развитием очагов клеточной пролиферации, д) с внутриклеточными включениями; 4) демонстрационная планшетка с положительной реакцией гемагглютинации; 5) фотография препарата или препарат для микроскопии с положительной реакцией гемадсорбции; 6) демонстрационный препарат инфицированной вирусами культуры клеток с феноменом бляшкообразования; 7) штатив с пробирки, демонстрирующими цветную реакцию Солка; 8) демонстрационные варианты постановки реакции нейтрализации вирусов.

Задание 1: проведите индикацию вирусов в культурах клеток по цитопатическому действию.

Ход работы

1 Рассмотрите фотографии или промикроскопируйте в световой микроскоп при большом увеличении препараты неинфицированных и инфицированных вирусами культур клеток с разными типами цитопатического действия: а) с крупноклеточной дегенерацией клеток; б) с мелкоклеточной дегенерацией клеток; в) с образованием симпластов; г) с развитием очагов клеточной пролиферации.

2 Определите, какой тип цитопатического действия вы обнаружили на препаратах культур клеток инфицированных вирусами.

3 В протоколе занятия назовите и нарисуйте типы цитопатического действия вирусов.

Задание 2: проведите индикацию вирусов в культурах клеток по наличию внутриклеточных включений.

Ход работы

1 Рассмотрите фотографии или промикроскопируйте в световом микроскопе при большом увеличении препараты инфицированных вирусами культур клеток с внутриклеточными включениями. Обратите внимание на расположение включений в клетке (в цитоплазме или в ядре) и их размеры и форму.

2 В протоколе занятий сделайте рисунки рассмотренных препаратов и укажите внутриклеточные включения.

Задание 3: проведите индикацию вирусов в культурах клеток с использованием реакции гемагглютинации и гемадсорбции.

Ход работы

1 Изучите механизм реакции гемагглютинации и гемадсорбции. В протоколе занятия опишите сущность этих реакций.

2 Рассмотрите демонстрационный материал (планшетка с положительной реакцией агглютинации и препарат для микроскопии с реакцией гемадсорбции).

3 В протоколе занятия сделайте рисунки рассматриваемых реакций.

Задание 4: проведите индикацию вирусов в культурах клеток с использованием феномена бляшкообразования.

Ход работы

1 Изучите метод бляшек. В протоколе занятия опишите сущность феномена бляшкообразования.

2 Рассмотрите демонстрационный материал с феноменом бляшкообразования. Обратите внимание на цвет питательной среды и наличие в ней бляшек (негативных колоний).

3 В протоколе занятия сделайте рисунок культуры клеток с феноменом бляшкообразования.

Задание 5: проведите индикацию вирусов в культуре клеток с использованием цветной реакции Солка.

Ход работы

1 Изучите методику постановки цветной реакции Солка. В протоколе занятия кратко опишите сущность этой реакции.

2 Рассмотрите демонстрацию результатов цветной реакции Солка.

3 В протоколе занятия отразите результаты реакции на рисунке и сделайте вывод о наличии вируса в культуре клеток.

Задание 6: проведите идентификацию вируса с использованием реакции нейтрализации.

Ход работы

1 Изучите методику постановки реакций нейтрализации вирусов. В протоколе занятия кратко опишите сущность этой реакции.

2 Рассмотрите демонстрационный материал с постановкой одного из вариантов реакции нейтрализации.

3 В протоколе занятия укажите продемонстрированный вам вариант реакции нейтрализации и нарисуйте схему постановки этого варианта реакции.